[发明专利]适于家蚕中部丝腺表达的鸡传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP2及其表达载体和应用

说明书

技术领域

本发明属于基因工程领域，特别涉及适于家蚕中部丝腺表达的鸡传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP2，还涉及表达鸡传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP2的表达载体和利用家蚕中部丝腺表达鸡传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP2的方法。 

背景技术

鸡传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease，IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease virus，IBDV)引起的以主要侵害雏鸡中枢免疫器官——法氏囊的传染病。该病可导致机体免疫抑制甚至个体死亡，并造成鸡群对其它病原的易感性增强和免疫失败，给养禽业带来了巨大的经济损失。近年来，世界多个国家或地区均发现了毒力更强、可逃避现行疫苗保护的IBDV变异株，使IBD的流行和防控更为复杂和困难。利用基因工程技术生产亚单位疫苗是防治畜禽疾病的重要方向和有效手段，可有效避免因传统灭活或弱毒IBDV疫苗无法识别的风险。VP2蛋白是IBDV的主要结构蛋白，含有病毒的主要抗原保护性位点，是开发亚单位疫苗的首选靶标。目前，研究人员利用大肠杆菌、酵母、重组病毒和水稻等表达系统，已成功表达了鸡传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP2，并证实能有效刺激中和抗体的产生，对鸡预防感染IBDV起到不同程度的保护效果。 

家蚕是著名经济昆虫，自被人类饲养驯化至今主要用于取丝织绸，为我国的经济发展做出了巨大贡献。家蚕丝腺是合成和分泌蚕丝蛋白的器官，具有强大的蛋白合成和分泌能力，从蚁蚕到熟蚕，丝腺的重量增加了16万倍，其重量占蚕体重量从4龄以下的5％，到5龄中期迅速增大，熟蚕时达到了40％～45％，成为蚕体内最大的器官。家蚕5龄中期以后丝腺中丝素蛋白的合成速度高达8mg/g﹒h。在脊椎动物中，小鸡肝脏是合成白蛋白速度最高的器官，约0.1mg/g﹒h，丝腺的合成速度是其80倍。家蚕以其超强的蛋白质合成能力、饲养成本低、对人畜无毒无害、易规模化和工厂化生产等优势，它被看作是一种极具潜力的优良生物反应器。但迄今尚无利用转基因家蚕表达鸡传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP2的方法和相关报道。 

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供适于家蚕中部丝腺表达的鸡传染性法氏囊病病毒 结构蛋白VP2；本发明的目的之二在于提供表达鸡传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP2的表达载体；本发明的目的之三在于提供表达载体在家蚕中部丝腺表达鸡传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP2中的应用；本发明的目的之四在于提供利用所述表达载体在家蚕中部丝腺表达鸡传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP2的方法。 

为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案： 

适于家蚕中部丝腺表达的鸡传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP2，所述鸡传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP2的基因序列如SEQ ID NO.1第7位至1329位所示。 

优选的，所述鸡传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP2的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。 

2、在家蚕中表达所述鸡传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP2的表达载体。 

优选的，所述表达载体含有顺序连接的增强子hr3，分泌型丝胶1基因启动子、鸡传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP2基因和丝胶1基因的终止子。 

优选的，所述表达载体还含有荧光筛选标记基因表达框和piggyBac转座臂序列，所述荧光筛选标记基因表达框位于所述增强子hr3上游，所述piggyBac转座臂序列位于荧光筛选标记基因表达框与丝胶1基因的终止子之间。 

优选的，所述表达载体由SEQ ID NO.3所示的序列经AscI酶切后连入同样经AscI酶切的、去磷酸化的pBac[3×p3-EGFPaf]转基因表达载体制得。 

3、所述表达载体在家蚕中部丝腺表达鸡传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP2中的应用。 

4、利用所述表达载体在家蚕中部丝腺表达鸡传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP2的方法，包括如下步骤：将所述表达载体显微注射家蚕蚕卵，用无毒胶水封口后置于25℃、相对湿度为90％的环境中孵化，筛选转基因阳性蛾圈，取阳性转基因家蚕茧壳，于液氮中粉碎成粉末，然后溶解于含20mM Tris-Cl，8M Urea，pH8.0的溶液中，15000rpm离心收集上清，经纯化，得鸡传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP2。