[发明专利]黄瓜靶斑病抗病连锁分子标记及其专用引物和应用

说明书

本发明公开了一种黄瓜靶斑病抗病连锁分子标记及其专用引物和应用。该分子标记是用以下引物自黄瓜总DNA中扩增出来的核苷酸序列之一：序列表中SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2、序列表中SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4。上述分子标记可鉴定目的基因黄瓜靶斑病抗病基因Cca的存在，实现对抗病植株的间接选择，由于不受其他基因效应和环境因素的影响，可用于早代选择，缩短育种年限，提高育种效率，为进行黄瓜靶斑病抗病育种提供技术支持。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域的分子标记，特别涉及与黄瓜靶斑病抗病基因Cca连锁的分子标记及其在黄瓜种质资源选择中的应用。

背景技术

黄瓜(Cucumis Sativus.L)在世界上广泛栽培，中国是世界上黄瓜栽培面积最大、总产量最高的国家。

黄瓜棒孢叶斑病，又称靶斑病，是一种世界性分布的病害。目前已成为危害黄瓜露地和保护地栽培的重要病害之一，尤以越冬温室、冬春温室、春大棚等保护地内发生严重。主要危害叶部，病斑初呈淡褐色后变褐绿色，严重时叶片枯死。该病导致落叶率低于5％时，病情扩展慢，约2周，而后一周内发展快，落叶率可由5％发展至90％。棚室内反季节种植黄瓜在冬春季节和初夏均易流行发病。田间发病率一般在10％-25％，严重时为60％-70％，造成损失达30％以上。靶斑病采用化学防治效果不理想，不仅使生产投入增加且会造成环境安全隐患，倒茬嫁接使技术困难和劳动成本增加。因此选育抗病品种是解决靶斑病危害的最佳途径。

黄瓜靶斑病抗病基因影响黄瓜对靶斑病的抗性，它的研究将会推动抗病育种进程。用与目的性状紧密连锁的分子标记进行标记辅助选择在黄瓜遗传育种中十分有效。分子标记是在DNA水平上对目标性状进行选择，具有高效、快速、不受环境条件限制等优点，可在苗期进行选择，加快育种进程。因此，开发用于辅助鉴定黄瓜靶斑病抗病基因Cca的分子标记十分重要。

发明内容

针对现有技术的缺陷，本发明的目的在于提供一种黄瓜靶斑病抗病连锁分子标记及其专用引物和应用。

为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

一种黄瓜靶斑病抗病连锁分子标记，是用以下引物自黄瓜总DNA中扩增出来的核苷酸序列之一：序列表中SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2、序列表中SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4。

获得上述黄瓜靶斑病抗病连锁分子标记的引物如下：1)获得黄瓜靶斑病抗病连锁分子标记CcaSNP1的引物为序列表中SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2；2)获得黄瓜靶斑病抗病连锁分子标记CcaSNP2的引物为序列表中SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4。

利用上述引物对，通过常规PCR法可得到上述分子标记。

本发明涉及的与黄瓜抗靶斑病共分离的dCAPs标记CcaSNP1，是利用抗/感遗传群体(母本：WF2757，抗靶斑病；父本：新泰密刺，感靶斑病)进行精细定位和克隆获得的。通过利用150株的F_2:3群体对靶斑病抗病基因Cca进行初步定位，然后利用2000株的F₂群体对Cca基因进行精细定位到80kb的区间内。该区间内含3个基因，分别是NB-ARC抗病基因、BIM2-like转录因子相关基因和33-like肽重复序列结构蛋白相关基因，其中NB-ARC基因经过验证分析，被证实为靶斑病抗病基因Cca的重要候选基因。通过对比研究Cca基因在抗/感黄瓜材料中的序列差异，发现一个SNP位点，依据http://helix.wustl.edu/dcaps/dcaps.html，在线设计软件，开发设计了与抗/感靶斑病紧密连锁的dCAPs分子标记CcaSNP1。同时利用CcaSNP1标记分析2000多株遗传群体材料，结合田间靶斑病接种鉴定研究，发现CcaSNP1标记与抗感靶斑病紧密连锁，达到共分离。