[发明专利]一种桑椹表面致腐菌的筛选方法在审
| 申请号： | 201410224683.9 | 申请日： | 2014-05-26 |
| 公开（公告）号： | CN104031839A | 公开（公告）日： | 2014-09-10 |
| 发明（设计）人： | 桂仲争;方银;贾俊强 | 申请（专利权）人： | 江苏科技大学 |
| 主分类号： | C12N1/02 | 分类号： | C12N1/02;C12N1/14;C12R1/645 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 楼高潮 |
| 地址： | 212003 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 桑椹 表面 致腐菌 筛选 方法 | ||
1.一种桑椹表面致腐菌的筛选方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)致腐菌液的制备：取腐烂桑椹，切碎后置无菌生理盐水中，混合物溶液的浓度为20-25％，在加热、振荡条件下培养，所得培养液即为致腐菌液；
(2)初筛培养基的制备：按照以下组份和含量制备初筛培养基：果胶或CMC-Na0.5％、K2HPO30.1％、(NH4)2SO42％、NaCl0.05％，琼脂1.8％，混合均匀后，灭菌，即可，其中涉及的百分比为质量百分比；
(3)致腐菌落群培养：将步骤(1)中的致腐菌液用无菌生理盐水稀释成稀释液，取1ml稀释液涂布于步骤(2)得到的初筛培养基上，培养，获得菌落群；
(4)单菌落培养：挑取初筛培养基上长出的菌落，接种至含桑椹汁的PDA培养基中进行纯培养，反复分离3-5次，获得的单一菌落即为致腐菌落；
(5)培养基验证和桑椹验证试验，初步验证所筛的病原菌为桑椹致腐菌；
(6)对所筛选的病原菌进行DNA鉴定，确定该病原菌的种属是链格饱属。
2.根据权利要求1所述的桑椹表面致腐菌的筛选方法，其特征在于步骤(1)的培养条件是28℃，2500rpm振荡条件下培养25-30min。
3.根据权利要求1所述的桑椹表面致腐菌的筛选方法，其特征在于步骤(2)的灭菌条件是：121℃灭菌20-25min。
4.根据权利要求1所述的桑椹表面致腐菌的筛选方法，其特征在于步骤(3)的培养条件是：27-28℃条件下培养72-78h。
5.根据权利要求1所述的桑椹表面致腐菌的筛选方法，其特征在于步骤(3)的稀释液浓度为10-4,10-5,10-6。
6.根据权利要求1所述的桑椹表面致腐菌的筛选方法，其特征在于步骤(4)PDA培养基中桑椹汁的质量浓度是10％。
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