[发明专利]心肌梗塞三联快速检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明专利涉及生物技术应用领域，特别涉及一种胶体金固相免疫层析法制备的以人髓过氧化物酶(MPO)及心脏脂肪酸结合蛋白(FABP3)为基础的三联快速检测试剂盒，用于心肌梗塞的早期预警及治疗过程和愈后的监控。

背景技术

急性心肌梗塞(AMI)严重威胁人类健康，而对于此类疾病的尽早诊断和治疗是降低病人死亡率的重要手段之一。特别是当心电图改变不明显的心肌梗塞发作时，仅依靠心电图、超声心动图和心脏核磁共振，难以作出准确诊断。

心脏标志物是指在血液中可测定出的一系列生物化学物质，它们能够敏感、特异的反映心肌损伤(异常)及其严重程度，因而可用作心肌损伤的筛查、诊断、评定预后和治疗效果的监测标志。心脏标志物在人体正常情况下主要存在于心脏，发生异常时由心脏大量释放，通过分子生物学和抗体技术可测定出血液中这些微量物质的变化，从而为临床提供高特异性的辅助诊断手段。

肌酸激酶同工酶、肌钙蛋白为代表的心脏标志物已广泛用于急性冠脉综合症的诊断和预后判断。但是，这些早期的心脏标志物都不能反映早期心肌损伤，也缺乏组织的特异性，它们还不能作为可靠的早期预警诊断。

髓过氧化物酶(MPO)是一种主要存在于嗜中性粒细胞或单核细胞的嗜天青颗粒中的过氧化物酶，与冠状动脉炎症密切相关，而冠状动脉炎症又与心肌梗塞密切相关。研究发现，MPO是一种新型的心肌梗塞早期预警标志物，炎症时激活的嗜中性粒细胞发生脱颗粒并释放髓过氧化物酶，它导致冠状动脉粥样硬化病灶不稳定甚至是破裂，使血管内皮下胶原组织暴露，随之发生血小板粘附聚集和血栓形成,造成冠状动脉阻塞，发生急性冠状动脉综合症，甚至是严重的心肌不可逆缺血损伤。MPO通过产生自由基和多种反应性物质，促进斑块形成和不稳定性增加，引起急性冠脉综合症。MPO是预测ACS患者发生不良心血管事件的一个新的预测因子，特别是在肌钙蛋白T(cTnT)水平较低的患者，MPO能够识别那些将来发生心血管事件危险性较高的患者,并提前3小时发出预警。大量临床研究资料表明，急性冠状动脉综合症的病人血清中MPO水平显著地升高。

人心脏脂肪酸结合蛋白(FABP3)是心脏中富含的一种新型小胞质蛋白。主要在心脏组织中表达，它具有高度心脏特异性。心肌缺血性损伤出现后，FABP3可以早在胸痛发作后1-3小时在血液中被发现，6-8小时达到峰值，在24-30小时内恢复正常。FABP3是一种对心肌损伤的早期诊断有意义的生物标志物，其特点有：(1)在心肌中高浓度；(2)在细胞质中限制；(3)低分子量和面积小；(4)相对组织特异性；(5)与心脏以外组织中CK-MB的分布相似；(6)在心肌损伤后早释进入血浆和尿液。缺血损伤后快速出现FABP3表明它可能经内皮途径到达循环。心脏中FABP3浓度比骨骼肌中高2-10倍(净重0.5vs.0.05-0.2mg/g)。与此相反，心脏细胞中肌红蛋白浓度比骨骼细胞中低2倍(2.5和4.0mg/g净重)。肌红蛋白的正常血浆浓度(20-80μg/l)比FABP3的(<5μg/l)高10-15倍。虽然血浆肌红蛋白水平升高是目前被广泛接受的早期心肌损伤标志，但FABP3更加具有心脏特异性。

目前国内外已有单独检测MPO及FABP3的试剂盒，主要采用酶联免疫法、化学发光法、非均相免疫法和固相免疫方法等，少数公司的产品已经获得FDA注册或CE认证。

然而，现有的产品多是针对单一指标进行控制，只能检测或预警心肌梗塞的某个阶段，不能全面地、特异性地预警心肌梗塞的发生、发展全程。由于目前MPO、FABP3均以不同的产品形式在临床上应用，制作原理及操作程序不同，兼容性比较差，很难在短时间内同时、快速地检测出两者的结果，故极大的影响了对急性ACS患者进行心梗风险的合理综合判定。MPO可以预警心肌梗塞发生前3小时的风险，但其他炎症下也存在指标升高的情况。FABP3仅能表示发生心肌梗塞后1～3小时的情况，不能在心肌梗塞发生前预警。目前的金标检测试剂盒为检测肌钙蛋白、肌酸激酶MB同工酶为主，而这些陈旧的指标出现在心肌梗塞发生后，只能显示已发生心梗，不能达到预警的目的。心电图虽然也可反映病人的病情，但在刚发生胸痛的病人中，虽然有已经开始了急性心梗的进程，却有半数以上的心电图表现为正常，从而造成很多病人因延误救治而死亡。

中国专利申请号201210491594.1公开了一种心肌梗塞预警胶体金试剂盒及其制备方法，该专利揭示了脂蛋白相关磷脂酶A2胶体金试剂盒的方法。