[发明专利]人白血病HL-60细胞耐药细胞株HL-60/RS细胞及其制备方法

权利要求书

1.人白血病HL-60细胞耐药细胞株HL-60/RS细胞，其特征在于，所述细胞系HL-60/RS的保藏编号为CCTCC NO：C201430，保藏时间为2014年4月16日，保藏地点为中国典型培养物保藏中心。

2.权利要求1所述的人白血病HL-60细胞耐药细胞株HL-60/RS细胞的制备方法，其特征在于，是以人类白血病HL-60细胞系为亲本细胞，采用阿霉素模拟体内化疗过程，逐步提高药物浓度、长期、间歇性反复冲击加持续诱导的方法，诱导建立获得性白血病多药耐药细胞系HL-60/RS。

3.根据权利要求2所述的人白血病HL-60细胞耐药细胞株HL-60/RS细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）取对数生长期的人类白血病HL-60细胞接种在含有以体积百分比计为15%的新生牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素的RPMI 1640培养液中，置于37℃、5%CO₂、饱和湿度环境下培养，得到细胞培养体系；

2）在步骤1）得到的细胞培养体系中加入阿霉素，起始冲击浓度为0.1mg/L，待细胞恢复正常生长时，再加以同浓度药物诱导，如此重复，直至细胞能在该浓度下正常存活和增殖时，再提高冲击药物浓度，进行第二轮冲击诱导，药物浓度增加的幅度为0.1mg/L；按上述方式反复间歇性冲击诱导，并随着冲击诱导次数及耐药性的增高，每轮药物浓度增加的幅度逐渐提高，初期幅度小，后期幅度加大，每轮冲击诱导药物浓度增加的幅度为0.1mg/L，0.2 mg/L，0.3 mg/L，0.5 mg/L，0.6 mg/L，0.8 mg/L，1.0 mg/L，1.5 mg/L，2.0 mg/L，2.5 m g/L，3.0 mg/L，3.5 mg/L，4.0 mg/L，5.0mg/L，每轮中同幅度增加冲击浓度的次数为1-3次，冲击诱导时间为20个月，至最终人类白血病HL-60细胞能够在含有40.0mg/L阿霉素的细胞培养体系中维持存活和增殖；撤离诱导药物置于无药体系中培养，耐药性保持稳定，得到具有耐药性的HL-60/RS细胞。