[发明专利]一种鼠源单克隆抗体CD151 9B及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及针对人四跨膜蛋白CD151-整合素α6β1复合体结合域的单克隆抗体CD1519B及其应用。

背景技术

肝癌属基因性疾病，一些关键基因在肝癌的侵袭和转移中起了重要作用。四跨膜蛋白CD151(Tetraspanin24，TM4SF24)是四跨膜蛋白家族最重要的成员之一，CD151基因定位于人类染色体11p15.5，其编码蛋白质形成四次跨膜分子。CD151在人体细胞中分布广泛，包括上皮细胞、内皮细胞和血小板等，参与细胞多种重要生理功能，如信号转导、细胞黏附、细胞移动与形态改变等。

多种恶性肿瘤组织包括肝癌中CD151过表达，其表达强度与患者预后密切相关。CD151通过与整合素、生长因子结合或自身相互结合形成功能复合体，影响肿瘤细胞迁移、病理血管形成和上皮间质样转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)等多个方面，参与肿瘤转移。研究证实，CD151通过与整合素α6β1等结合形成功能复合体，募集细胞内磷脂酰肌醇-3-激酶(Phosphatidylinositide3kinases，PI3K)、蛋白激酶C(Protein kinase C，PKC)、细胞分裂控制蛋白42(Cell division control protein42，Cdc42)、Ras等信号分子，促进细胞的代谢、生长、增殖和细胞内肌动蛋白聚合，参与肿瘤细胞迁移、病理血管形成和形态改变等过程促进肿瘤转移。CD151可增强整合素α6β1与其配体层粘连蛋白-1之间的结合，加快细胞在层粘连蛋白-1基膜上的移动而促进肿瘤细胞迁徙。

前期系列研究发现，CD151是影响肝癌转移复发的关键蛋白。我们发现，(1)肝癌细胞中CD151表达程度与其侵袭、转移能力密切相关，CD151表达改变可显著影响肝癌细胞的侵袭和转移能力；(2)CD151通过激活PI3K/蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶-3β(Glycogen synthase kinase-3β，GSK-3β)/Snail信号通路促进基质金属蛋白酶9(Matrix metallopeptidase9，MMP9)分泌和表达，促进肝癌新生血管形成；(3)CD151与整合素α6β1在肝癌细胞表面形成复合物，过表达CD151可选择性扩大整合素α6β1-PI3K信号导致核转录因子Snail(锌指转录因子Snail作为EMT过程中的关键调控因子在肿瘤的侵袭转移中起重要作用)的核聚 集与激活，从而促进肝癌EMT发生；(4)基于免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation，coIP)结合液相色谱串联质谱(liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS/MS)技术，肝癌细胞株HCCLM3细胞中CD151可与整合素α6、β1等分子伴侣结合形成功能复合。因此，四跨膜蛋白CD151与整合素α6β1等结合所形成的功能复合体是抗肿瘤复发/转移的潜在靶点。

目前已有几种抗人CD151单克隆抗体用于肿瘤治疗的实验研究，并显示出一定的疗效。但这些抗体制备时未考虑CD151功能发挥依赖于功能复合体存在这一特征，因此这些单克隆抗体在抑制肿瘤的侵袭同时也影响其的多种重要生理功能，如信号转导、细胞黏附、细胞移动与形态改变。

因此，本领域迫切需要研制具有针对CD151-整合素α6β1复合体结合域的靶向单克隆抗体，为临床治疗开发治疗效果更佳、副作用更小的药物。

发明内容

本发明的目的是提供一种靶向针对人CD151-整合素α6β1复合物结合域的鼠源单克隆抗体(CD1519B)及其应用，新研制的抗体能定位、表达细胞、组织(如肝细胞癌)内CD151蛋白，一方面不影响CD151正常的生理功能，另一方面又能竞争性抑制CD151过表达引起的肝癌侵袭和转移。

为了达到上述目的，本发明提供了一种靶向人四跨膜蛋白CD151-整合素α6β1复合体结合域的鼠源单克隆抗体CD1519B，其特征在于，由保藏号为CGMCC No.9156的杂交瘤细胞产生。

优选地，所述的靶向人四跨膜蛋白CD151-整合素α6β1复合体结合域的鼠源单克隆抗体CD1519B包含可与人四跨膜蛋白CD151-整合素α6β1复合体结合的功能域，该功能域包含至少一个轻链可变区和至少一个重链可变区。

更优选地，所述的功能域选自单克隆抗体，完整抗体，单链抗体(scFV)，Fab片段，Fd片段，Fv片段，F(ab')2片段及其功能性衍生物。