[发明专利]一种含黄芪甲苷药物分离制备及定性、定量测试前处理方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种药物分离制备及定性、定量前处理方法，具体涉及一种含黄芪甲苷药物在分离制备及定性、定量测试前的前处理方法。

背景技术

黄芪是常用中药，包括豆科植物亚历山大黄芪（AstragalusalexandrinusBoiss）根、深裂黄芪Astragalusdissectus的根、膜荚黄芪（Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bungede）的根、绵毛黄芪（AstragalussieversianusPall.）的根、多刺黄芪AstragalusspinosusVahl地上部分。主要成分包括皂苷、黄酮及多糖等，而黄芪甲苷（Astragaloside）是皂苷类的主要成分之一。具有显著降低血糖、糖化血红蛋白和尿蛋白的作用；可降低肾皮质和血清中的AGEs、具有抗氧化作用；对醛糖还原酶有抑制作用；抑制系膜细胞增生、减轻肾脏肥大的作用；增强机体免疫力、提高机体的抗病能力、抗病毒作用、抗应激功效等。可用于预防和治疗糖尿病肾病。

目前，处方中包含黄芪的药物种类及数目越来越多，而黄芪甲苷是黄芪中的主要指标成分之一，常作为定性定量指标。若直接对其进行分析，则因杂质干扰太大而不能满足分析的要求。《中国药典》2010版一部黄芪药材项下黄芪甲苷的前处理包括索氏提取、蒸干后水溶解、正丁醇萃取、氨试液洗涤、大孔树脂柱层析等过程，该方法具有操作繁琐、处理效率低、准确度低、重复性差等缺点。《香港中药材标准》中虽然对黄芪甲苷的处理方法进行了改进，用甲醇超声取代索氏提取的方法，但依然采用正丁醇萃取等操作，依然具有操作繁琐、重复性差等缺点。实践证明，萃取是决定准确度、重复性结果及处理效率最重要的关键步骤，在萃取过程中，容易产生乳化、分层不明显等现象影响结果的准确度。因此，两种法定前处理方法均未避免萃取这一关键步骤，因此均存在上述缺陷。

发明人根据黄芪甲苷的结构特征，采用弱碱性溶液去除有机酸类、酚类等物质；再用较低浓度的乙醇溶液洗脱层析柱，继续除去一部分杂质，达到消除杂质干扰、实现分离制备及定性、定量分析的目的。

发明内容

本发明的目的是提供一种含黄芪甲苷药物的前处理方法，克服目前黄芪甲苷前处理方法中存在的缺陷。

本发明运用一种简便易行、准确度高、重复性好的方法对其进行处理，主要涉及黄芪甲苷的纯化过程。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

1.黄芪甲苷提取物的制备：取含黄芪甲苷药物，采用常规提取工艺提取、浓缩获得黄芪甲苷提取物浸膏或溶液。

2.上样液的制备：取含黄芪甲苷的浸膏或溶液，加入10~100倍的氨试液，摇匀，即得；

3.纯化：将上样液转移至大孔树脂中，至上样完毕，用1~10倍柱体积稀乙醇冲洗树脂柱，弃去洗脱液；

4.收集：待稀乙醇除杂完毕，再用较高浓度乙醇冲洗树脂柱，收集洗脱液，获得黄芪甲苷。

上述步骤1中所述的含黄芪甲苷提取物浸膏为含黄芪甲苷药物经提取制备所得，可采用已知的超声提取、回流提取、索氏提取等多种提取工艺。

上述步骤2中所述的氨试液为市售常规试剂。

上述步骤3大孔树脂为市售通用规格，型号可包括AB-8、HPD100、D-101、HP20、H20、D1400。

上述步骤3所述的稀乙醇为市售乙醇加水稀释，浓度为10～50％，优选40％。

上述步骤4所述的高浓度乙醇为市售乙醇加水稀释，浓度为60～95％，优选70％。

通过上述过程制成的黄芪甲苷可用于含黄芪药物的分离制备及定性、定量测定。

本发明具有以下有益效果：

1．含黄芪药物的前处理采用一次柱层析分离即可实现，制得的黄芪甲苷可用于分离制备及定性、定量测定，相比于《中国药典》2010版一部、《香港中药材标准》及其它文献方法操作更为简便；

2．本发明方法制得的黄芪甲苷在开展定性、定量测试研究中重复性好，加样回收率合格，优于其它已知的前处理工艺。

附图说明

图1为黄芪甲苷结构式。

图2为黄芪甲苷专属性试验（1.空白溶剂；2.阴性对照；3.黄芪甲苷对照品；4.阳性供试品）。

图3为黄芪甲苷线性关系结果。

图4为实施例1结果。

图5为实施例2结果。

图6为实施例3结果。

图7为实施例4结果。

图8为实施例5结果。

图9为实施例6结果。