[发明专利]一种试剂及其在二价铜离子检测中的应用

权利要求书

1.一种试剂：它是吡哆醛肼,其特征在于结构式为：

2.如权利要求1所述的一种试剂的合成方法，其特征在于步骤为：吡哆醛盐酸和过量的水合肼在乙醇中回流8小时，冷却后过滤，再用乙醇和水重结晶得到白色的固体。

3.一种检测二价铜离子的方法：其特征在于，步骤为：

(1)、配制pH＝7.4、浓度为10mM的HEPES缓冲溶液，配制2mM的吡哆醛肼甲醇溶液；

(2)、按体积比5:5:1，将HEPES缓冲溶液、甲醇溶液和吡哆醛肼的甲醇溶液加到干净的荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上检测，随着待测样的加入,455nm的荧光强度逐渐减弱；

(3)、用蒸馏水配制2mM的Cu²⁺溶液，把1mL的HEPES缓冲溶液、1mL的甲醇溶液、200μL的吡哆醛甲醇溶液加到另一个荧光比色皿中，分别在加入二价铜离子溶液的体积为10、20、30、40、50、60、70、80μL时，在荧光分光光度仪上测定455nm对应的荧光强度F为177、153、131、110、88、63、42、17，以Cu²⁺浓度为横坐标，以相对荧光强度F₀－F为纵坐标绘制图，F₀﹦201，得到Cu²⁺浓度的工作曲线；线性回归方程为：F₀－F＝3.28+2.23c，c的单位为μM；

(4)、将HEPES缓冲溶液1000uL、甲醇溶液1000uL和吡哆醛肼甲醇溶液200uL加到干净的荧光比色皿中，用微量进样器吸取VμL待测样品溶液，加入到此干净的荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上检测，将测得的荧光强度代入步骤(3)的线性回归方程，得到浓度c，待测样品C_待测样＝(2200+V_待测样)μL×c×10^-6/VμL,即可求得Cu²⁺的浓度。