[发明专利]紫海胆壳棘提取物及在制备抑制癌细胞生长药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种紫海胆壳棘提取物及在制备抑制癌细胞生长药物中的应用。

背景技术

海胆始载于《本草原始》，别名海胆虎（《动物图谱﹒棘皮》），属于棘皮动物门（Echinodermata）、海胆纲（Echinoidea），紫海胆Anthocidaris crassispina (A．Agassiz)是其中一种。

海胆由壳（骨壳）、棘（棘刺）和内脏组成，是营养丰富的海珍品。尽管现代医学证明海胆壳、棘及生殖腺等部位有良好的药用价值，但所报道的主要功效如下：海胆性“咸”，“平”（《中药志》），“有小毒”（《山东中草药手册》），“主治心疼”（《本草原始》），有“软坚化痰，散结消肿，消瘰疬痰核、制酸止痛，清热解毒”的功用。迄今为止，未见有关于紫海胆壳棘提取物有抑制癌细胞生长作用的相关报道，以至于海胆壳棘多被作为废弃物而丢弃，浪费了潜在的药用资源。

发明内容

本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种紫海胆壳棘提取物及在制备抑制癌细胞生长药物中的应用。

本发明的技术解决方案是：一种紫海胆壳棘提取物，其特征是依次按照如下步骤提取：

a. 以紫海胆Anthocidaris crassipina动物壳棘为原料，经粉碎烘干后用乙醇提取，将提取液减压浓缩后得浸膏；

b. 取浸膏溶于水，用石油醚萃取，合并水相部分；再用乙酸乙酯萃取，合并水相部分；再用正丁醇萃取，合并正丁醇层，减压浓缩；

c. 将经减压浓缩的正丁醇层经正相硅胶柱层析，用乙酸乙酯-甲醇进行梯度洗脱，收集乙酸乙酯：甲醇梯度为100：5~100：6的洗脱液，为一次洗脱液；浓缩所收集的一次洗脱液并再次进行正相硅胶柱层析，用乙酸乙酯-甲醇进行梯度洗脱，收集乙酸乙酯：甲醇梯度为100：3~100：4的洗脱液，为二次洗脱液，合并、浓缩二次洗脱液并重结晶，得到紫海胆壳棘提取物。

所述a步骤是以质量浓度75%的乙醇在23~28℃的温度条件下提取4小时，料液比为1：20。

一种上述紫海胆壳棘提取物在制备抑制癌细胞生长药物中的应用。

所述紫海胆壳棘提取物在制备抑制癌细胞生长药物中的应用，是在制备抑制血癌、乳腺癌或直肠癌细胞生长药物中的应用。

本发明是以来源广泛、价格低廉的海胆加工废弃物——海胆壳、棘为原料，利用溶剂提取法对其进行提取，并经有机溶剂萃取、硅胶柱层析而获得的提取物。所得到的提取物经抗肿瘤实验证明，对人慢性髓性白血病细胞K562、人早幼粒极性白血病细胞HL60、人乳腺癌细胞SKBR-3、人乳腺癌细胞MCF-7、人结直肠腺癌细胞SW620有显著的细胞毒性作用，其IC50值均在30-90μg·ml^-1之间，并具有剂量依赖性。细胞凋亡实验表明该提取物有显著诱导HL60急髓白血病M3细胞株、SKBR-3人乳腺癌细胞和SW620结肠癌细胞凋亡的作用，其诱导凋亡作用有剂量依赖性，因此本发明提取物有显著的细胞毒性和诱导细胞凋亡的作用。本发明操作简单，所用溶剂均为普通化学试剂，易重复，适于大规模生产。

附图说明

图1本发明提取物对人慢性髓性白血病细胞K562体外实验抑制率示意图。

图2本发明提取物对人早幼粒极性白血病细胞HL60体外实验抑制率示意图。

图3是本发明提取物对人乳腺癌细胞SKBR-3体外实验抑制率示意图。

图4是本发明提取物对人乳腺癌细胞MCF-7体外实验抑制率示意图。

图5是本发明取物对人结直肠腺癌细胞SW620体外实验抑制率示意图。

图6~图10本发明提取物对人早幼粒极性白血病细胞HL60的诱导凋亡作用示意图。

图11~图15本发明提取物对人乳腺癌细胞SKBR-3的诱导凋亡作用示意图。

图16~图20本发明提取物对人结直肠腺癌细胞SW620的诱导凋亡作用示意图。

图21本发明提取物对人早幼粒极性白血病细胞HL60的流式细胞术实验抑制率示意图。

图22本发明提取物对人乳腺癌细胞SKBR-3的流式细胞术实验抑制率示意图。

图23本发明提取物对人结直肠腺癌细胞SW620的流式细胞术实验抑制率示意图。

具体实施方式

依次按照如下步骤提取：