[发明专利]一种医药级重组人血清白蛋白的纯化方法

权利要求书

1.一种可应用于工业化大生产的纯化rHSA的方法，包括将含rHSA的发酵液经过冷冻浓缩，依次经过电层析分离、蓝胶交换层析、特异性的抗酵母细胞残留物的多克隆抗体去除宿主杂质、rHSA单克隆抗体亲和层析和ConA糖基化层析去除多糖残留和内毒素，得到医药级（临床上的注射剂级）纯度的rHSA。

2.根据权利要求1所述的方法，其中冷冻浓缩技术采用冷冻浓缩装置，冷冻含有rHSA发酵上清液的温度范围为-80^oC到0^oC，优选为-30^oC到-15^oC；搅拌转速100-5000 rpm，优化500-2000 rpm。

3.根据权利要求1所述的方法，其中电层析分离采用pH1-4，pH4-5和pH5-13三个不同的酸碱度进行rHSA的纯化，优选为pH2-3，pH4-5和pH8.5-9.5三个酸碱度；电场阳极和阴极的电压为20-400V，优选100-200V；电场电流为1-1000mA，优选20-100mA。

4.根据权利要求1所述的方法，其中特异性的抗酵母细胞残留物的多克隆抗体，酵母细胞蛋白残留物，采用甲醇酵母细胞残留物，优选巴斯德毕赤酵母GS115（Pichia pastoris GS115）细胞的残留物（Pichia pastoris components, PPC）；抗PPC多克隆抗体与活化填料偶联制备成特异性的亲和PPC填料。

5.根据权利要求1所述的方法，其中rHSA单克隆抗体，采用人血浆来源的人血清白蛋白（pHSA）免疫小鼠或者兔子，优选小鼠；取小鼠脾脏细胞，与sp2/0细胞杂交，筛选单克隆细胞株；抗pHSA单克隆抗体与活化填料偶联制备成特异性的亲和rHSA填料。

6.根据权利要求1所述方法，制备的rHSA具备下述特征：rHSA分子量为66.5 kDa，等电点4.6-5.0；在rHSA为25%的注射液中，rHSA纯度为99.999999%，酵母细胞蛋白残留（PPC）低于0.15 ppm，优选0.1 ppm；多糖残留低于10 ng/ml，优选1 ng/ml；内毒素含量小于0.4 EU，优选0.1 EU。

7.根据权利要求1所述的方法，制备医药级rHSA的方法可用于工业化生产。

8.根据权利要求1所述的方法，制备的rHSA作为医药级别的人血清白蛋白，与从人血浆来源的pHSA具有相同的临床应用，可用于临床上病人注射剂。