[发明专利]一种高纯度罗汉果皂苷Ⅴ的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物提取技术领域，特别涉及一种高纯度罗汉果皂苷Ⅴ的制备方法。

背景技术

罗汉果皂苷Ⅴ是罗汉果主要活性成份之一，在干果中的总含量为3.7%左右，是主要的甜味成份，甜度是蔗糖的300倍。罗汉果树的果实中含量较高，其叶子、杆和根中含量较少。罗汉果皂苷是一种三萜烯葡萄糖苷，其配糖原是三萜烯醇。罗汉果皂苷Ⅴ连接了五个糖基，因此甜极高，其稳定性好，是天然的甜味剂。

罗汉果皂苷Ⅴ有三个比较突出的特点：一是甜度高、热量低，是糖尿病患者良好的调味剂；二是具有较强的保健功能，现代作用表明：罗汉果皂苷Ⅴ具有提高免疫功能，保护肝脏及抑菌、降血糖、抗氧化等作用；三是毒性低、安全系数高，其水提物的LO30大于10g/kg。因此，罗汉果皂苷作为一种理想的天然功能性甜味剂，具有广阔的市场发展空间。

目前，国内罗汉果通常都以原果的形式出口到欧美、日本等发达国家，虽然出口量大，但利润空间小、附价值低，一直以来西方发达国家由于包含中摄糖量增多，导致肥胖，糖尿病患者日益增多，同时国内沿海经济发达地区这种现象也越来越普遍，而罗汉果中罗汉果皂苷Ⅴ作为一种糖度高、卡路里低的甜味剂，加上其制成的产品口味纯正、味道新颖，不但能满足西方人对糖分需求，同时又不会导致肥胖，因此以罗汉果皂苷Ⅴ为添加剂的食品成为肥胖患者和糖尿病患者的保健食品，其市场前景无论是在国外还是国内，都将不可限量。

近年来，国内外对罗汉果皂苷Ⅴ成分的研究颇多，但主要集中在非糖类的甜味物质葫芦素、烷三萜类化合物的研究上，对其他成分如氨基酸、黄酮和维生物等也有研究。但文献记载不多。对罗汉果皂苷提取方法的研究，国外大都采用无机吸附剂和无机脱色剂，操作工艺复杂，无法工业化生产，特别是工业生产中不能很好的解决罗汉果皂苷的脱色、除杂问题。

CN1324043C的发明公开了一种高纯度罗汉果甜苷Ⅴ的制备方法，先将罗汉果粉碎，用乙醇加热回流提取，再将提取物用D101型大孔树脂柱分离，先去离子水和乙醇分别洗脱至无色，再收集其洗脱液，减压浓缩至浸膏状，然后用正相硅胶柱分离，加入氯仿、甲醇、水为洗脱剂，收集洗脱液，减压浓缩，再用反相硅胶C-18柱分离。其中存在的问题是：该方法最后采用正、反相硅胶柱分离纯化，这样的分离纯化法只适合实验室操作，完全无法工业化生产，其次，洗脱时，采用的洗脱剂是含有大量有毒的氯仿、甲醇、丙酮等有机溶剂，生产成本高，产品不可避免的会带有这些有机溶剂的残留，产品具有少量的毒性，安全性不好，且操作也相对来说较复杂。

发明内容

本发明的目的在于一种高纯度罗汉果皂苷Ⅴ的制备方法，操作简便，生产成本低，产品无毒，安全性好，产品纯度高，脱色效果好。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种高纯度罗汉果皂苷Ⅴ的制备方法，包括如下步骤：

（1）将新鲜罗汉果打成桨糊状，加入2-4倍重量的去离子水加热条件下高剪切萃取20-40min，过滤，滤渣再加上述同样重量的去离子水加热条件下高剪切萃取20-40min，过滤，合并所得滤液并减压浓缩至原体积的10%-15%得到A。

本发明采用新鲜罗汉果作为原料，无需干燥粉碎后提取，只需简单的打成桨糊状即可进行后续提取。本发明针对新鲜罗汉果的提取，采用水提法，在较低温度（50-60℃）下配合高剪切进行提取，相对于常规的醇提法，生产成本更低，安全性好，无农药残留，保证食品安全，提取时间短，提取效果相当。

（2）将A用AB-8型大孔吸附树脂柱分离，先用PH 9-11的碱性水洗脱至无色，再用去离子水洗至中性，最后用30%-50%的乙醇溶液作为洗脱剂洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至原体积的10%-15%得到B。

在初级分离时，本发明选择AB-8型大孔吸附树脂柱分离，这样对有效成份吸附常量大，对有效成份容易解吸，树脂再生性能优异，可以几十次重复使用，树脂价格相对较低，更适合工业化生产。首次洗脱是本发明采用PH 9-11的碱性水洗脱，洗脱效果好，脱色性好，避免使用乙醇，进一步降低成本，更适合工业化生产。

（3）将B用001×16强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂柱分离，用PH 1-3的酸性水作为洗脱剂洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至原体积的10%-15%得到C。

（4）将C用D941弱碱性阴离子交换树脂柱分离，用PH7-9的水作为洗脱剂洗脱，收集洗脱液，减压浓缩至原体积的10%-15%得到D，D喷雾干燥后得到纯度在95%以上的罗汉果皂苷Ⅴ。