[发明专利]一种慢生根瘤菌培养基的配置方法及其配制的培养基

权利要求书

1.一种慢生根瘤菌培养基的配制方法，包括如下步骤：

步骤1.准确称取5重量份的K₂HPO₄、5重量份的KH₂PO₄、4重量份的MgSO₄·7H₂O、2重量份的NaCl，置于大烧杯中；

步骤2.相对于步骤1中的16重量份的混合物，单位为克，往所述大烧杯中加入1ml的1wt％的柠檬酸铁溶液，和1ml的1wt％的MnSO₄溶液；

步骤3.准确称取大豆粉200重量份置于大烧杯中，所述大豆粉为干大豆磨成粉状，剔除表皮制成；

步骤4.准确称取4重量份的CaCO₃置于玻璃容器中，将步骤3得到的混合物与CaCO₃在玻璃容器中混合；

步骤5.相对于步骤1中的16重量份的混合物，用量筒量取1000ml的蒸馏水加入所述玻璃容器中，用玻璃棒搅拌至完全溶解并混合均匀得到培养基；

步骤6.调节所述培养基的pH值为6.8-7.0；

步骤7.所述培养基装入锥形瓶中，简单的封口，用高压灭菌锅在121℃灭菌40分钟，待灭菌锅压力降到0Pa，取出培养基，置于无菌操作台上，让其自然降温。

2.根据权利要求1所述的慢生根瘤菌培养基的配制方法，其特征在于：

在步骤4中，还和CaCO₃一起加入300重量份的琼脂，同时在步骤7之后，还具有步骤8，待培养基温度降到约60℃，以无菌操作将培养基倒入无菌的有盖培养皿，每个培养皿放置少量的培养基，待培养基冷凝后将培养皿倒置，使所述培养皿的盖子向下。

3.根据权利要求2所述的慢生根瘤菌培养基的配制方法，其特征在于：

其中，无菌操作要求为：将培养基从所述锥形瓶中倒入所述培养皿中在酒精灯的无菌区来操作，但不能离火焰太近，倒培养基时培养皿的盖子的开口不超过45°。

4.根据权利要求1-3所述的慢生根瘤菌培养基的配制方法，其特征在于：

步骤4中所述玻璃容器为所述大烧杯，或试管。

5.根据权利要求4所述的慢生根瘤菌培养基的配制方法，其特征在于：

其中，配置柠檬酸铁溶液，或MnSO₄溶液的方法为：取柠檬酸铁或MnSO₄1g放入小烧杯中，加100ml蒸馏水溶解，如果是配置柠檬酸铁溶液，一边加热一边搅拌，加热前应在100ml位置处做标线，加热过程中及时补充蒸发水分，保证溶剂恒量。

6.根据权利要求5所述的慢生根瘤菌培养基的配制方法，其特征在于：

在步骤2中添加柠檬酸铁溶液，或MnSO₄溶液的方法：用移液枪移液至大烧杯中，移液之前，要保证移液器、枪头和液体处于相同温度，吸取液体时，移液器保持竖直状态，将枪头插入液面下2－3毫米，在吸液之前，先吸放几次液体以润湿吸液嘴，并保证吸液嘴上不能悬挂有液滴。

7.根据权利要求4所述的慢生根瘤菌培养基的配制方法，其特征在于：

在步骤6中调节pH值的方法为：用pH计测定培养基的pH值，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH边加边搅拌，反之，用1mol/L HCl进行调节，将pH调节至6.8-7.0。

8.根据权利要求4所述的慢生根瘤菌培养基的配制方法，其特征在于：

所述培养基各个成分的配比为：大豆粉10g，K₂HPO₄0.25g，KH₂PO₄0.25g，MgSO₄·7H₂O0.2g，NaCl0.1g，CaCO₃0.2g，1wt％的柠檬酸铁1ml，1wt％的MnSO₄1ml，蒸馏水1000ml。

9.一种慢生根瘤菌培养基，采用权利要求1-7中任一项所述的方法制成。