[发明专利]自然无血凝性水貂肠炎病毒株MEV-NH及其制备方法和应用

权利要求书

1.自然无血凝性水貂肠炎病毒株MEV-NH，其特征在于，该水貂肠炎病毒(Mink enteritis virus)NH于2014年03月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.8858。

2.根据权利要求1所述的自然无血凝性水貂肠炎病毒株MEV-NH，其特征在于，其VP2基因序列如序列表SEQ IE NO 3所示。

3.根据权利要求1所述的自然无血凝性水貂肠炎病毒株MEV-NH，其特征在于，其VP2氨基酸序列如序列表SEQ IE NO4所示。

4.制备权利要求1所述的自然无血凝性水貂肠炎病毒株MEV-NH的方法，其特征在于，该方法的条件和步骤如下：

a、将疑似水貂病毒肠炎发病貂的稀粪用无血清MEM制成体积比为10％的悬液，无血清MEM中青霉素和链霉素各为2000U/mL，冻融一次，以5000r/min离心10min，取上清，0.22μm滤膜除菌，-80℃保存；

b、将处理好的病料上清液按3％的比例同步接种于CRFK细胞，于37℃、5％的CO₂培养箱中培养4～5天，观察细胞病变；

c、病毒接种细胞CPE达80％，收取病毒培养物，反复冻融三次，用收获培养物接种细胞进行病毒传代得到水貂肠炎病毒(Mink enteritis virus)NH。

5.如权利要求1所述的自然无血凝性水貂肠炎病毒株MEV-NH作为验证疫苗免疫原性的检验强毒株的应用。

6.根据权利要求5所述的自然无血凝性水貂肠炎病毒株MEV-NH作为验证疫苗免疫原性的检验强毒株的应用，其特征在于，用1～2月龄健康水貂10只，随机选取5只作为免疫组，每只各注射接种1头份疫苗，剩余5只作为对照组，每只各注射生理盐水2ml；21天后，所有10只水貂都接种水貂肠炎病毒MEV-NH流行株细胞培养物1ml，连续观察14天，对照组水貂全部表现出水貂病毒性肠炎症状，而免疫疫苗组水貂全部未表现出水貂病毒性肠炎症状，说明该疫苗能够对水貂产生无血凝性MEV-NH流行株的免疫保护作用。