[发明专利]猪伪狂犬病病毒基因缺失株、疫苗组合物及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种猪伪狂犬病毒弱毒株，其中，该猪伪狂犬病毒弱毒株为缺失UL21基因的猪伪狂犬病毒变异株。本发明还提供了包含该猪伪狂犬病毒弱毒株抗原的疫苗组合物，及其制备方法和应用。经活疫苗免疫原性实验和致病性免疫原性试验证明，该猪伪狂犬活疫苗具有很好的保护力，基本没有临床症状，显示出很好的免疫保护。

技术领域

本发明涉及一种猪伪狂犬病病毒基因缺失株、及其制备的疫苗组合物，以及制备方法和应用，属于动物病毒学领域。

背景技术

伪狂犬病，又称Aujeszky氏病，是由疱疹病毒科(Herpesviridae)α亚科中的猪疱疹病毒Ⅰ型(Suid herpesvirus1strain)所引起的猪、牛、羊等多种家畜、家禽和野生动物的一种以发热、奇痒(除猪外)及脑脊髓炎为主症的急性传染病。猪的伪狂犬病在我国广泛存在，危害严重，是制约规模化猪场生产的主要疫病之一。它能引起妊娠母猪流产、死胎或木乃伊胎和仔猪出现神经症状、麻痹，死亡率高。PRV具有较强的泛嗜性、神经嗜性及潜伏感染特性，在外周神经系统可以长期潜伏感染，当潜伏病毒被激活变成有感染力的病毒，被潜伏感染的宿主就会发病。

现在技术普遍使用gE缺失的伪狂犬弱毒疫苗防治猪伪狂犬病，使用采用自然缺失或者人工缺失某些毒性基因的毒株来预防猪伪狂犬病，例如BUK株是Bucharest株经过鸡胚和鸡胚成纤维细胞800次传代获得的弱毒疫苗株，其缺失了大部分gE基因。还有人工缺失的伪狂犬SA215毒株HB-98株等用于预防猪伪狂犬病。

最近的研究报道称猪伪狂犬病发生了新的特点，突出表现为任何年龄的猪都会感染，可在猪群水平传播，潜伏期短(1～2天)，发病率在10％～100％之间，发病猪死亡率在10％～100％之间(仔猪死亡率可高达100％)，感染后可引起猪只高热(40～42℃，持续3日以上)，呼吸困难，腹泻，喘，咳嗽，打喷嚏，后肢麻痹，犬坐，突然倒地，抽搐，侧卧不起，角弓反张，泳状划水，最后衰竭而死，并可引起种公猪精液质量下降，怀孕母猪流产(高达35％)，早产，死胎，弱仔(弱仔14日龄前全部死亡)等繁殖障碍症状。现有技术的疫苗免疫猪只后不能完全抵抗野毒攻击，依然会出现高热，精神沉郁，食欲下降或废绝等症状，感染率超过80％，发病率超过30％，死亡率在10％～20％之间。例如彭金美等.猪伪狂犬病病毒新流行株的分离鉴定及抗原差异性分析.中国预防兽医学报，2013，35(1)：1-4；童武等.免疫后发病仔猪中伪狂犬病毒的分离和鉴定.中国动物传染病学报，2013,21(3):1-7；Yu et al.,Pathogenic Pseudorabies Virus,China,2012.Emerging infectious Diseases.2014,20(1):102-104；An et al.,Pseudorabies virus variant in Bartha-K61-vaccinatedpigs,China,Emerging infectious Diseases.2013.19(11)：1749-1755)，现有技术还没有疫苗能够解决针对猪伪狂犬变异株引起的伪狂犬病。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明提供了一种活的减毒猪伪狂犬病毒株，用于防治变异伪狂犬病毒引起的猪狂犬病。其中，所述猪伪狂犬病病毒株缺失UL21基因。优选地，所述伪狂犬病毒株为伪狂犬变异株。

作为本发明的一种实施方式，本发明提供一种缺失UL21基因的伪狂犬病毒基因工程弱毒株。

优选地，所述伪狂犬变异株为gE蛋白序列为SEQ ID NO.07或与其序列同源性为95％以上的的毒株；更优选地，所述的猪伪狂犬变异株为经分离的所述猪伪狂犬病毒变异株当重现所述猪伪狂犬病毒变异株感染时，免疫了现有技术中基因缺失伪狂犬弱毒疫苗后依然会造成猪出现高热，精神沉郁，食欲下降或废绝症状的毒株；最优选地，所述的猪伪狂犬变异株为当重现所述猪伪狂犬病毒变异株感染时，免疫了现有技术中缺失gE、TK和gI基因中的一个及一个以上基因的伪狂犬弱毒疫苗后依然感染猪伪狂犬病并具备具有使9-10日龄仔猪精神沉郁和食欲下降的毒株。