[发明专利]分化无核细胞及其制备方法

权利要求书

1.一种制备成熟红细胞的方法，其包含：在诱导分化成红细胞的试剂存在下培养条件永生化造血干细胞，其中所述试剂为IL-3和EPO；其中所述试剂将条件永生化造血干细胞诱导分化为成熟红细胞；

其中通过以下来产生所述条件永生化造血干细胞：

a.使用第一核酸转导多个造血干细胞，所述第一核酸包含编码MYC分子的核酸序列；

b.使用第二核酸转导所述造血干细胞，所述第二核酸包含编码Bcl-2、Bcl-X或其组合的核酸序列；及

c.将所述造血干细胞与IL-3、IL-6、干细胞因子、血小板生成素、Flt3配体或其组合一起培养；

且其中在分化之前已抑制所述Myc分子的一种或多种活性，或已抑制Myc分子的存在。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一核酸进一步包含人类雌激素受体的激素结合结构域。

3.根据权利要求1所述的方法，其进一步包含诱导所述Myc分子移位至细胞核。

4.根据权利要求1至3中任一权利要求所述的方法，其中所述第二核酸编码Bcl-2。

5.一种产生成熟红细胞的方法，其包含：在诱导分化成红细胞的试剂存在下培养条件永生化造血干细胞，所述试剂为IL-3和EPO；其中所述试剂将条件永生化造血干细胞诱导分化为成熟红细胞；

其中通过以下来产生所述条件永生化造血干细胞：

a.使多个造血干细胞与重组的第一肽接触，所述第一肽包含移位至细胞核的MYC分子，所述第一肽具有MYC生物活性；

b.使所述造血干细胞与重组的第二肽接触，所述第二肽包含Bcl-2、BCL-X或其组合，所述第二肽在所述细胞内具有抗凋亡功能；及

c.将所述造血干细胞与IL-3、IL-6、干细胞因子、血小板生成素、Flt3配体或其组合一起培养；

且其中在分化之前所述第一肽的活性或存在降低。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述第一肽、所述第二肽、或所述第一肽与所述第二肽二者包含转运蛋白序列。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其中所述第一肽、所述第二肽、或所述第一肽与所述第二肽二者包含TAT序列。

8.根据权利要求1至6中任一权利要求所述的方法，其中所述MYC分子是c-Myc、1-Myc、n-Myc、s-Myc或其组合。

9.根据权利要求5至7中任一权利要求所述的方法，其中所述第二肽是Bcl-2。

10.根据权利要求1至6中任一权利要求所述的方法，其进一步包含使所述造血干细胞与雌二醇(E2)、4-羟基他莫昔芬(4-hydroxytamoxifen)(4-OHT)或二者接触。

11.根据权利要求1至6中任一权利要求所述的方法，其中所述造血干细胞进一步包含编码目标多肽的核酸。

12.一种成熟的红细胞，其由根据权利要求1至6中任一权利要求所述的方法所产生。

13.一种组合物，包括：根据权利要求12所述的成熟的红细胞，所述组合物用于治疗选自由以下组成的群组的病症：表征为成熟红细胞的缺陷的病症、表征为失血的病症、贫血、高歇氏病、溶血、嗜中性白血球减少症、血小板减少症、粒细胞减少和血友病。