[发明专利]抗肝癌干细胞单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种单克隆抗体。

背景技术

肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，其病死率居恶性肿瘤的第3位，肝癌患者5年生存率仅有14％～30％。原发性肝癌具有发病隐袭、病死率高的特点，早期诊断及防止复发对预后意义重大。自单克隆抗体技术问世后，人们试图通过应用抗肝癌单克隆抗体提高肝癌的早期诊断率及治疗效果，但目前获得的抗肝癌单克隆抗体的特异性尚不令人满意，由于肿瘤异质性的存在，又使其临床应用受到一定影响。因此，有必要寻找更好的抗肝癌特异性单克隆抗体，以提高对肝癌诊治的特异性。近年来，肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)已成为肿瘤研究的新热点。由于CSC是肿瘤转移、复发和耐药的根源，因此，建立靶向CSC的治疗新策略有望克服临床上现有治疗手段的缺陷，改善肝癌患者的预后。发明人所在课题组前期基于肿瘤干细胞同胚胎干细胞的相似性，以Nanog作为分选标记，构建了以Nanog为启动子调控GFP表达的慢病毒报告系统Lv-Nanog(p)-GFP，分选获得的Nanog阳性的肝癌细胞经体内外试验证实具有肿瘤干细胞特性(Hepatology2012)。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于以Nanog阳性的肝癌细胞作为免疫原及筛选抗原，通过单克隆抗体技术筛选出针对肝癌干细胞的单克隆抗体，并对该单克隆抗体针对的抗原进行研究，以期为靶向肿瘤干细胞的肝癌治疗提供有应用前景的功能性单克隆抗体。

经研究，本发明提供如下技术方案：

1.抗肝癌干细胞单克隆抗体，由保藏编号为CGMCC No.8800的小鼠杂交瘤细胞4P-120分泌产生。

2.抗肝癌干细胞单克隆抗体在制备肝癌治疗药物中的应用。

本发明的有益效果在于：本发明以Nanog阳性的肝癌细胞作为免疫原及筛选抗原，通过单克隆抗体技术筛选出能够稳定分泌单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株4P-120，其分泌的单克隆抗体经实验证实，能够特异性结合肝癌细胞并特异性识别肝癌组织；该单克隆抗体所识别的抗原在人肝癌的癌组织中高表达而在癌旁组织中不表达或低表达，并在细胞增殖过程中存在阳性向阴性的分化以及阴性向阳性的逆分化；相比抗原低表达细胞，抗原高表达细胞有更强的增殖能力、克隆形成能力、成球能力、划痕迁移能力和侵袭转移能力；因此，本发明为靶向肿瘤干细胞的肝癌治疗提供了有应用前景的功能性单克隆抗体，其可以用于制备肝癌治疗药物。

生物材料保藏

小鼠杂交瘤细胞4P-120于2014年3月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所)，保藏编号为CGMCC No.8800。

附图说明

为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图进行说明：

图1为鼠抗人肝癌干细胞PLC-Nanog^POS单克隆抗体4P-120与不同细胞系的反应情况。

图2为鼠抗人肝癌干细胞PLC-Nanog^POS单克隆抗体4P-120与人肝癌组织及正常肝脏组织的反应情况。

图3为鼠抗人肝癌干细胞PLC-Nanog^POS单克隆抗体4P-120所识别的抗原在人肝癌组织和癌旁组织中的表达情况。

图4为鼠抗人肝癌干细胞PLC-Nanog^POS单克隆抗体4P-120所识别的抗原在细胞增殖过程中的表达变化情况。其中，A、B为从PLC-Nanog细胞中分别分选4P-120抗原与Nanog双阴性细胞(P9)、4P-120抗原单阳性细胞(P8)、4P-120抗原与Nanog双阳性细胞(P6)、4P-120抗原单阴性细胞(P7)这四个细胞群体；C、D、E、F为对分选出的P9、P8、P7、P6细胞群体进行流式回测的结果；G、H、I、J为培养7d后对P9、P8、P7、P6细胞群体进行4P-120抗原分化情况的流式检测结果。

图5为4P-120抗原高表达细胞有更强的增殖能力。

图6为4P-120抗原高表达细胞有更高的克隆形成能力。

图7为4P-120抗原高表达细胞有更高的成球能力。

图8为4P-120抗原高表达细胞有更高的划痕迁移能力。

图9为4P-120抗原高表达细胞有更高的侵袭转移能力。

具体实施方式

下面将结合附图，对本发明的优选实施例进行详细的描述。