[发明专利]一种基于DNA-银纳米簇（DNA-Ag NCs）适体传感器，及其制备方法，用途以及检测方法

说明书

技术领域

本发明属于生物传感技术领域，具体涉及一种DNA-Ag NCs适体传感器的制备方法及对PDGF-BB的检测。

背景技术

近年来，应用于临床诊断相关的蛋白质组学越来越重要，因此发展生物传感器用于检测与癌症相关的蛋白质十分有必要。血小板源生长因子-BB(PDGF-BB)与多种疾病密切相关，如动脉硬化、纤维病，并且作为肿瘤血管发生指示剂在人类恶性肿瘤细胞中过度表达。因此开发高选择性、高灵敏性、低耗及无标记的生物传感器用于检测PDGF-BB至关重要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于DNA-银纳米簇(DNA-Ag NCs)适体传感器，及其制备方法，用途以及检测方法，应用于PDGF-BB蛋白质的检测。本发明以DNA为模板，利用化学还原法制得了具有荧光性质的DNA-Ag NCs，通过PDGF-BB及其适配体之间的特异性结合打开杂交的双链DNA，利用富G碱基的DNA在血晶素(hemin)和K⁺存在时形成的DNA模拟酶(DNAzyme)使得荧光DNA-Ag NCs发生猝灭，制备了基于DNA-Ag NCs的适体传感器，此传感器实现了对PDGF-BB高灵敏、高选择性的检测。

具体技术方案如下：

一种基于DNA-银纳米簇(DNA-Ag NCs)适体传感器的制备方法，包括如下步骤：

(1)DNA探针加热一定时间后自然冷却并培养一段时间；

(2)DNA溶液加入AgNO₃后振荡；

(3)黑暗中放置一段时间；

(4)溶液中加入NaBH₄，振荡，黑暗中放置；

(5)得到具有荧光性的DNA-Ag NCs。

进一步地，步骤(1)中，10μM DNA探针于80-90℃加热数分钟后自然冷却到室温培养50分钟。

进一步地，步骤(2)中DNA溶液加入AgNO₃后剧烈振荡30秒，步骤(3)中黑暗中放置20分钟。

进一步地，步骤(4)中溶液中加入NaBH₄，剧烈振荡30秒，黑暗中至少放置1-2小时。

一种基于DNA-银纳米簇(DNA-Ag NCs)适体传感器，采用上述的方法制备得到。

上述基于DNA-银纳米簇(DNA-Ag NCs)适体传感器的用途，用于无标记检测血小板源生长因子-BB(PDGF-BB)。

上述基于DNA-银纳米簇(DNA-Ag NCs)适体传感器无标记检测PDGF-BB的方法，包括如下步骤：

a、Apt-G4探针加热数分钟后自然冷却培养一段时间；

b、步骤a得到溶液加入一定浓度AgNO₃并振荡；

c、步骤b得到溶液黑暗中放置一段时间后加入一定浓度NaBH₄并振荡；

d、步骤c中溶液加入不同浓度的PDGF-BB，血晶素(hemin)及K⁺，此混合溶液于黑暗中继续培养数小时。

步骤a中，10μM Apt-G4探针于80-90℃加热数分钟后自然冷却到室温培养一段时间；步骤b中，加入一定浓度AgNO₃并剧烈振荡一段时间，黑暗中放置一段时间后加入一定浓度NaBH₄并剧烈振荡。

步骤d中，溶液黑暗中放置一段时间后加入不同浓度的PDGF-BB，1.0μM血晶素(hemin)及50mM K⁺，此混合溶液于黑暗中继续培养数小时。

进一步地，步骤a中，10μM Apt-G4探针于88℃加热10min后自然冷却到室温培养50min；和/或，步骤b中，溶液加入20μL170μM AgNO₃并剧烈振荡30s，黑暗中放置20min后加入20μL170μM NaBH₄并剧烈振荡30s；和/或，步骤d中，溶液黑暗中放置50min后加入不同浓度的PDGF-BB，1.0μM hemin及50mM K⁺，此混合溶液于黑暗中继续培养2.0h。

与目前现有技术相比，本发明制备DNA-Ag NCs方法与已有技术相比，具有重现性高，耗能低，制备时间短且易控制等优点。以此无标记的适体传感器检测PDGF-BB，线性范围宽，检测限低，且本传感器选择性佳，灵敏度高。

附图说明

图1为基于DNA-Ag NCs适体传感器无标记检测PDGF-BB示意图；

图2为合成的DNA-Ag NCs的SEM图；