[发明专利]一种高稳定性饲用液体复合酶的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种高纯度高稳定性饲用液体复合酶的制备方法。

背景技术

酶是一种活性蛋白质，对外部环境很敏感，在高温、高压下极易变性失活，目前，外援酶在家禽家畜饲料中的添加应用发展较快，现有加酶饲料中颗粒饲料占有较大比重。在颗粒饲料的生产过程中，需要在高温高压蒸汽下调制后挤压制粒之后进入冷却系统，颗粒进入冷却系统之前的料温可达到78～90℃，高温导致饲料自身的内源酶和外添加酶的活性受到不同程度的损失。为降低酶活损失，通常采用酶的稳定化技术和后喷涂技术，后喷涂技术作为一项新型的饲料加工工艺，可以有效的保护酶以及和酶性质相似的热敏性组分的有效性。因此，利用液体酶进行的后喷涂技术得到良好的推广应用，液体酶的制备成为现有研究热点。 

传统液体复合酶的制备技术中一般采用固体发酵法，将固体发酵曲料经传统常规工艺进行压榨过滤后，对得到的滤清液进行简单处理即作为液体复合酶成品，由于各酶种的生产工艺、生产条件及菌种差异等极易产生沉淀，复合酶稳定性较低，使用这种液体复合酶制剂进行喷涂时，不仅会导致喷雾系统堵塞，损坏喷涂设备，而且还对自动化生产造成不便；同时，一般先将单酶混合后再进行简单纯化，提纯工艺简单，杂质酶无法去除，且单酶的比例不易控制，不能灵活按照需要进行任意比例的复配。

发明内容

本发明目的在于提供一种高稳定性饲用液体复合酶的制备方法，解决现有饲用液体复合酶制备中采用固体发酵法得到发酵曲料、由曲料得到滤清液的处理过程简单原始、成品复合酶稳定性较低易沉淀、使用时易导致喷雾系统堵塞损坏喷涂设备、不仅对自动化生产造成不便还造成酶活浪费的问题；还解决现有多种单酶混合后再处理的工艺制作过程中成品酶的酶种组成配比不可调节、生产和贮存期间酶活大量损失的问题；还解决现有技术设备和材料投入成本高的技术问题。

为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案如下：

一种高稳定性饲用液体复合酶的制备方法,其特征在于具体包括下列步骤：

A、选用高产单酶的工程菌株，进行大规模液体深层工业发酵，产出单酶含量较高的发酵液；

B、将液体发酵产出的单酶发酵液过碟片离心机，得到单酶清液；

C、将单酶清液过陶瓷膜，截留残留菌体以及比酶分子大的颗粒，收集清液得到单酶陶清液；

D、将单酶陶清液过有机膜，截留酶分子，排出小分子的杂蛋白、无机盐和一部分水，同时使酶液浓缩，得到单酶浓缩酶液；

E、在所得单酶浓缩酶液中加离子水进行稀释，得到单酶稀释酶液；

F、在所得到的单酶稀释酶液中加入沉降剂、稳定剂和防腐剂，并调节pH至4.4～5.5，置于玻璃钢罐体中进行自然沉降；

G、通过玻璃钢罐体侧壁上的清液放料口取出沉降好的单酶清液；

H、按照步骤A～G的方法制备其他单酶清液；

I、在去离子水中加入稳定剂、防腐剂，并调节pH至4.4～5.5，得到稀释液；

J、将步骤H中沉降好的多种单酶清液和步骤I中制备的稀释液进行均匀混合，至此，液体复合酶制备完成。

作为本发明的优选技术方案，本专利中提到的酶种范围即所述步骤A或H中的单酶为NSP（非淀粉多糖）单酶，如木聚糖酶、葡聚糖酶、甘露聚糖酶等，也可为植酸酶。

作为本发明的优选技术方案，所述步骤C中陶瓷膜的孔径范围为0.05～0.1μm。

作为本发明的进一步优选技术方案，所述步骤D中有机膜截留小分子的分子量为8000～10000。

作为本发明的进一步优选技术方案，所述步骤E中稀释酶液的最终稀释浓度为：纤维素酶3000～5000U/g,其余单酶的酶活3～5万U/g。

作为本发明的进一步优选技术方案，所述步骤F中的沉降剂为十二水合硫酸铝钾、硫酸锌，其重量比为稀释酶液:十二水合硫酸铝钾:硫酸锌=100:0.5～0.6:0.3～0.5。

作为本发明的进一步优选技术方案，所述步骤F中的稳定剂为山梨糖醇、葡萄糖、硫酸镁和乙酸钠，其重量比为稀释酶液:山梨糖醇:葡萄糖:硫酸镁:乙酸钠=100:8～12:3～6:0.8～1.3:3～6。

进一步的，所述步骤F中的防腐剂为苯甲酸钠、山梨酸钾、卡松和氯化钠，其重量比为稀释酶液:苯甲酸钠:山梨酸钾:卡松:氯化钠=100:0.1～0.25:0.4～0.6:0.15-0.25:10～14。