[发明专利]一种潜在的高效重组HIV‑1CRF07‑BCgp140免疫原的制备方法

权利要求书

1.一种针对HIV-1中国流行株CRF07的高效重组gp140免疫原的制备方法。其特征在于针对中国最广泛的流行株CRF07，并且是在结构基础上重新设计的。获得的gp140均一性好，抗原反应性高，非常适合作为免疫原用于艾滋病亚单位疫苗或者是多价联合疫苗的研发。

2.根据权利要求1所述的潜在的gp140免疫原的制备方法，其特征在于载取的gp120的片段为44-493位氨基酸(参照HIV-1HXB2标准株gp160编号，下同)，截取的gp41的NHR片段为534-591位氨基酸，截取的CHR片段为623-662位氨基酸。

3.根据权利要求1所述的潜在的gp140免疫原的制备方法，其特征在于连接gp41NHR和CHR的linker为GGSGG连接，连接gp120与gp41的linker为GSGAG。

4.根据权利要求1所述的潜在的gp140免疫原的制备方法，其特征在于通过将pMT载体的V5表位替换为烟草蚀纹病毒蛋白酶(TEV酶)的酶切位点，使我们能够用TEV酶除去目的蛋白羧基末端的组氨酸标签(6×His-tag)，使目的蛋白羧基末端尽可能少地带有非必要的氨基酸残基，更适合用作免疫原。

5.根据权利要求1所述的潜在的gp140免疫原的制备方法，其特征在于用重叠延伸PCR技术获得该gp140的基因片段，将目的基因克隆入真核表达载体pMT，经质粒大提去除内毒素后，与抗性筛选质粒pCoBlast一起共转染黑腹果蝇Schneider2(S2)细胞，用杀稻瘟菌素(Blasticidin S)进行阳性筛选，筛选出稳定高效分泌表达gp140的S2细胞系。扩大培养后，经镍柱亲和层析和凝胶过滤层析两步纯化，即可获得高纯度的gp140。