[发明专利]重组表达人呼吸道合胞病毒F1蛋白胞外区的方法及表达系统

说明书

技术领域

本发明属于病毒学和生物工程领域；更具体地，本发明涉及重组表达人呼吸道合胞病毒F1蛋白胞外区的方法及表达系统。

背景技术

人呼吸道合胞病毒能够感染婴儿、小孩与老人等免疫力低下群体；引起上呼吸道感染，出现咳嗽、流涕与发烧等感冒样症状，并且还能造成婴幼儿的下呼吸道感染，引起细支气管炎、哮喘与肺炎等疾病，严重时危及生命。

因为该病毒能够诱导感染细胞形成合胞，故名为人呼吸道合胞病毒。F蛋白在感染过程中分裂形成F1与F2两个功能性亚单位，辅助病毒感染细胞；同时F蛋白决定该病毒主要的免疫原性。其中F1蛋白起着主要作用，从分子量上占据了80%的F蛋白，它包含有胞内区、胞膜区与胞外区，直接介导病毒与细胞的融合，胞外区包含了主要的F蛋白抗原决定簇，主导F蛋白与该病毒的免疫原性。

现有技术中，对于人呼吸道合胞病毒F1蛋白的重组表达主要集中在原核系统表达，但是原核表达系统的缺陷是易于产生包涵体，经历变复性步骤之后使得蛋白的三级结构产生破环。而应用真核系统进行表达的一般方法并不易于成功表达。因此，本领域有必要研究开发有利于表达F1蛋白(包含其抗原决定簇)的方法，从而为后续制备疫苗或抗病毒制剂奠定基础。

发明内容

本发明的目的在于提供重组表达人呼吸道合胞病毒F1蛋白胞外区的方法及表达系统。

在本发明的第一方面，提供一种重组表达人呼吸道合胞病毒F1蛋白胞外区的方法，包括：利用果蝇S2细胞作为表达宿主，表达人呼吸道合胞病毒F1蛋白胞外区；其中，所述的人呼吸道合胞病毒F1蛋白胞外区的氨基酸序列如SEQIDNO:4所示。

在一个优选例中，利用果蝇S2细胞作为表达宿主表达人呼吸道合胞病毒F1蛋白胞外区的方法包括：

(1)提供表达载体，所述的表达载体中含有人呼吸道合胞病毒F1蛋白胞外区的表达盒；

(2)将(1)的表达载体转化果蝇S2细胞，培养转化有所述表达载体的重组果蝇S2细胞，从而表达人呼吸道合胞病毒F1蛋白胞外区。

在另一优选例中，所述的表达盒中包括SEQIDNO:3所示的核苷酸序列。

在另一优选例中，所述的表达载体是果蝇表达载体，如pMT质粒，更具体地如pMT/BIP/V5-His-A。

在另一优选例中，培养转化有所述表达载体的重组果蝇S2细胞包括：以大于2×10⁶细胞/ml的接种量将重组果蝇S2细胞接种于培养基中，28±1℃培养，待细胞密度达到1×10⁷细胞/ml后，补加培养基；待细胞密度再次达到1×10⁷细胞/ml后，以诱导剂CdCl₂诱导培养。

在另一优选例中，诱导培养后还包括：收集细胞培养液，离心收集培养上清液，亲和层析纯化。

在本发明的另一方面，提供一种人呼吸道合胞病毒F1蛋白胞外区，其氨基酸序列如SEQIDNO:4所示。

在本发明的另一方面，提供一种多核苷酸，其编码所述的人呼吸道合胞病毒F1蛋白胞外区。

在一个优选例中，所述的多核苷酸的核苷酸序列如SEQIDNO:3中第2-1132位所示。

在本发明的另一方面，提供一种表达载体，其包含所述的多核苷酸。

在本发明的另一方面，提供一种重组果蝇S2细胞，其包含所述的表达载体，或其基因组中整合有所述的多核苷酸。

本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

附图说明

图1、截短的hRSV-F1-1cDNAPCR扩增结果。

图2、截短的hRSV-F1-1基因与pMT/BIP/V5-His-A重组质粒PCR鉴定结果。

图3、转染截短的hRSV-F1-1的S2细胞培养上清的westernblot鉴定。

图4、转染截短的hRSV-F1-2的S2细胞培养上清的westernblot鉴定。第1道是Marker，第2道是转染细胞1没有诱导，第3道是转染细胞1有诱导，第4道是转染细胞2没有诱导，第5道是转染细胞2有诱导。

图5、稳转细胞株细胞培养上清液WesternBlot分析结果。