[发明专利]微小分子RNA-1247-5p作为新型肿瘤治疗分子靶标的用途

说明书

本发明提供一种小分子miRNA‑1247‑5p稳定过表达肝癌细胞系的建立方法及其对肝癌细胞株新陈代谢的调控作用，很可能成为预防与治疗肿瘤的标志物。越来越多的证据表明，microRNA可作为一种癌基因或抑癌基因，参与调控多种癌症的发生和发展过程。本发明通过构建慢病毒侵染肿瘤细胞模型的实验证明，miRNA‑1247‑5p对肿瘤细胞株HepG2增殖、迁移和侵袭等具有明显抑制作用，具有调控细胞周期及新陈代谢的作用，因此miR‑1247‑5p很可能成为肿瘤预防与治疗的全新靶点；并且通过靶基因预测数据库及双荧光素酶报告系统证实miR‑1247‑5p发挥细胞调控作用，是通过特异性靶向抑制癌基因无翅型MMTV整合位点家族成员3(WNT3)的表达来实现的。

技术领域

本发明涉及一种内源性的非编码小分子RNAs稳定过表达细胞系的建立方法，尤其涉及miR-1247-5p在肝癌细胞株HepG2细胞稳定过表达细胞系的建立以及其在预防与治疗肝癌疾病中作为新的肿瘤标志物以及抗肿瘤药物研制中的用途。

背景技术

肝癌是目前世界上发病率仅次于胃癌和食道癌的第三大的恶性肿瘤。肝癌恶性程度极高，预后较差，死亡率居各种恶性肿瘤前列。肝癌主要分为原发性肝癌以及转移性肝癌两大类，在我国，肝癌的死亡率占常见肿瘤的第二位。在肝癌的发病机制中，Wnt/β-catenin信号通路主要通过激活下游c-myc，cyclingD1，c-iun等靶基因的转录而导致肝癌的发生与发展，同时GSK3β/APC/Axin降解复合体的功能异常也是肝癌进展过程中的重要因素。因此，通过分子治疗的方法可以有效控制肝癌的发生与发展，开展肝癌发病机制及临床治疗的研究是减轻其危害的根本途径。

MicroRNA(miRNA)是近年来发现的一类内源性非编码单链RNA，其长约为18～25个核苷酸。miRNA通过Watson-Crick碱基互补匹配原则，对靶mRNA进行降解或抑制翻译来调节蛋白的表达。据预测，人类约含有1000个miRNA，参与调控超过30％的蛋白编码基因，在生物体的生长、发育、分化等方面起着重要的作用。miRNA的异常表达，参与肿瘤的各种生物学过程，包括肿瘤细胞增殖、凋亡和迁徙、侵袭等。越来越多的证据表明，microRNA可作为一种癌基因或抑癌基因，参与调控多种癌症的发生和发展过程。依此推断，miRNA可作为一种癌基因或抑癌基因。

以慢病毒载体作为研究小分子MicroRNA的手段已被多种研究采用，利用慢病毒携带外源基因可以持续在宿主细胞内稳定表达的特点，可以持续稳定表达对肿瘤细胞有某些特定功能的基因，建立稳定表达系可以更好的对这一基因的生物学功能以及其应用价值提供模型基础。

通过miRBase检索成熟miR-1247-5p序列信息，TargetScan、miRanda等进行靶基因预测，miR-1247-5p靶向抑制预测靶基因WNT3基因的表达。无翅型MMTV整合位点家族成员3(winglesstype MMTV integration site family member3，WNT3)存在于Wnt/β-catenin信号通路上游。WNT信号通路是一条存在于低等生物至高等生物中的高度保守通路，其通路成员具有高度同源性，调控了包括动物胚胎早期发育，器官形成，组织再生等生物学过程，在多个体外肿瘤模型中WNT信号通路均存在不同程度激活。在众多的miRNA中，miR-1247已经被研究证实在多种肿瘤模型中表达异常，并很可能参与肿瘤的进程，成为潜在的抑癌基因，而目前miR-1247-5p在肝癌肿瘤细胞中的调控作用机制及对其增殖与凋亡进程影响的研究仍不清楚，因此，开发以miR-1247-5p为策略的肝癌疾病的预防、诊断和治疗的基础研究和抗肿瘤药物研究具有重要的意义和应用前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种微小分子RNA-1247-5p(miR-1247-5p)在肝癌细胞HepG2细胞中稳定表达的方法以及在预防与治疗肝癌疾病及抗肿瘤药物中的作用，所述miR-1247-5p的核苷酸序列如下所示：5’-ACCCGUCCCGUUCGUCCCCGGA-3’。

本发明的研究基础：