[发明专利]使ACC-α基因启动子PⅢ失活的物质及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及使ACC-α基因启动子PⅢ失活的物质及其应用。

背景技术

基因打靶技术是一种定向改变生物体遗传信息的技术，但对于动物体细胞的打靶效率很低（仅为10^-6-10^-7）。伴随着分子生物学的不断发展，涌现出很多新的技术和方法来提高基因打靶效率，如采用无启动子筛选的基因打靶策略，动物中干细胞的分离及诱导等，但是这些改进对于生产基因打靶动物并没有显著的推动作用，基因打靶动物的生产一直处于缓慢发展阶段。最近几年，类转录激活因子效应物核酸酶(TALENs)的出现极大地提高了基因打靶的效率，其将成为生产基因敲除动物的一个重要突破口。

类转录激活因子效应物核酸酶(TALENs)融合了DNA调控元件特异性结合DNA的特性以及内切核酸酶的催化活性，N末端的TALE蛋白结合域能够特异结合DNA序列，通过C末端内切核酸酶FokI的催化作用，使得DNA双链分子产生断裂（DSB），紧接着DSB就会启动细胞内自身修复机制。目前主要的修复机制有两种：一种是非同源重组的末端连接修复机制，另一种是同源重组修复机制。前一种修复机制是一种易错修复常常会产生遗传信息的改变，而利用同源重组修复机制来修复DSB是一种高保真的修复方式，一般以另一条姐妹染色体为模板进行精确修复。在哺乳动物细胞内，前一种修复机制占主导作用，借助TALENs特异性产生DSB，引发细胞非同源重组的末端连接修复，在DSB位点引入小片段删除或插入，造成移码突变，或者引发失活突变等，达到使目的基因失活的目的。该技术的关键在于靶点区域的选择。

随着人们生活水平的提高，对健康优质奶品的要求也越来越高，人们更加关注牛奶中的优质蛋白质，同时希望牛奶中所含的脂肪更少。对于目前市场上的脱脂牛奶来说，在脱脂的过程中脂溶性的维生素也会被除去，主要是维生素A和维生素D，影响了人体对钙质的吸收，而且如果完全脱掉牛奶中的脂肪，会破坏其营养价值，影响牛奶的口感和风味。

发明内容

本发明的目的是提供使ACC-α基因启动子PⅢ失活的物质在生产产低脂奶的奶牛中的应用。

本发明首先保护一种蛋白组，由TALE蛋白甲-Ⅰ和TALE蛋白甲-Ⅱ组成；所述TALE蛋白甲-Ⅰ包括序列表的序列14自N末端第180-791位氨基酸残基组成的结合域和序列表的序列14第867-1062位氨基酸残基组成的功能域；所述TALE蛋白甲-Ⅱ包括序列表的序列15自N末端第190-733位氨基酸残基组成的结合域和序列表的序列15自N末端第809-1004位氨基酸残基组成的功能域。所述TALE蛋白甲-Ⅰ具体可如序列表的序列14所示。所述TALE蛋白甲-Ⅱ具体可如序列表的序列15所示。所述TALE蛋白甲-Ⅰ和所述TALE蛋白甲-Ⅱ具体可等质量配比。

本发明还保护一种DNA组，由TALE基因甲-Ⅰ和TALE基因甲-Ⅱ组成；所述TALE基因甲-Ⅰ编码所述TALE蛋白甲-Ⅰ；所述TALE基因甲-Ⅱ编码所述TALE蛋白甲-Ⅱ。所述TALE基因甲-Ⅰ包括序列表的序列10自5’末端第548-2383位核苷酸所示的结合域编码区和序列表的序列10自5’末端第2609-3199位核苷酸所示的功能域编码区。所述TALE基因甲-Ⅱ包括序列表的序列11自5’末端第578-2209位核苷酸所示的结合域编码区和序列表的序列11自5’末端，第2435-3025位核苷酸所示的功能域编码区。所述TALE基因甲-Ⅰ具体可如序列表的序列10所示。所述TALE基因甲-Ⅱ具体可如序列表的序列11所示。所述TALE基因甲-Ⅰ和所述TALE基因甲-Ⅱ具体可等质量配比。

本发明还保护一种RNA组，由TALE-RNA甲-Ⅰ和TALE-RNA甲-Ⅱ组成；所述TALE-RNA甲-Ⅰ为所述TALE基因甲-Ⅰ编码的RNA；所述TALE-RNA甲-Ⅱ为所述TALE基因甲-Ⅱ编码的RNA。所述TALE-RNA甲-Ⅰ和所述TALE-RNA甲-Ⅱ具体可等质量配比。