[发明专利]一种具有高转糖苷活性的β-半乳糖苷酶突变体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种具有高转糖苷活性的β-半乳糖苷酶突变体，其在序列2或序列4所示的氨基酸序列的基础上，通过单位点的定点饱和突变所获得的；

其中突变位点为第219位、第245位或者第785位氨基酸；

其中单位点的定点饱和突变分别为用甘氨酸残基取代第219位的丝氨酸残基（S219G）、用谷氨酸残基取代第219位的丝氨酸残基（S219E）、用苯丙氨酸残基取代第219位的丝氨酸残基（S219F）、用缬氨酸残基取代第219位的丝氨酸残基（S219V）、用丙氨酸残基取代第219位的丝氨酸残基（S219A）、用精氨酸残基取代第245位的苯丙氨酸残基（F245R）、用赖氨酸残基取代第245位的苯丙氨酸残基（F245K）、用甘氨酸残基取代第245位的苯丙氨酸残基（F245G）、用丝氨酸残基取代第245位的苯丙氨酸残基（F245S）或用缬氨酸残基取代第785位的谷氨酸残基（E785V）。

2.编码权利要求1所述突变体的DNA分子。

3.含有权利要求2所述DNA分子的重组表达载体。

4.根据权利要求3所述的重组表达载体，其为重组酵母表达载体。

5.表达权利要求2所述DNA分子的宿主细胞。

6.根据权利要求5所述的宿主细胞，选自糖酵母属、克鲁维氏酵母属、裂殖糖酵母属和甲基营养型酵母菌株。

7.根据权利要求6所述的宿主细胞，其中甲基营养型酵母菌株优选为毕赤氏酵母属菌株。

8.一种制备具有高转糖苷活性的β-半乳糖苷酶的方法，包括以下步骤：

1）用权利要求3所述的重组表达载体转化宿主细胞，获得重组菌株；

2）培养上述重组菌株，诱导重组β-半乳糖苷酶的表达；

3）回收并纯化所表达的高转糖苷活性的β-半乳糖苷酶。

9.权利要求1所述的突变体、权利要求2所述的DNA分子、权利要求3或4所述的重组表达载体、权利要求5或6所述的宿主细胞在制备β-半乳糖苷酶中的应用。