[发明专利]检测猪唾液中伪狂犬病毒gB蛋白特异性抗体的方法

权利要求书

1.一种检测猪唾液中伪狂犬病毒gB蛋白特异性抗体的方法，其特征在于包括如下步骤：

1）利用悬挂棉绳法，诱导动物咀嚼，采集唾液，处理后获得唾液一抗；

2）将唾液一抗，以PBST溶液1:2稀释后，按编号加入伪狂犬病毒gB抗原包被的96孔聚苯乙烯反应板的反应孔中，每个反应孔加150ul，37℃饱和湿度反应1小时, 以PBST洗涤3次；

3）将辣根过氧化物酶标记的羊抗猪IgG-FC抗体，以 PBST溶液1:1500稀释后，按顺序加入到96孔聚苯乙烯反应板的反应孔中，每个反应孔加100ul，37℃饱和湿度避光反应30分钟，以PBST洗涤3次；

4）将5%的二甲氧联苯胺显色剂，按顺序加入到96孔聚苯乙烯反应板的反应孔中，每个反应孔加50ul，避光反应15分钟，随后每个反应孔加入50ul 2M浓硫酸；

5）放入酶标仪中，读取OD405数据，判定结果。

2. 根据权利要求1所述的一种检测猪唾液中伪狂犬病毒gB蛋白特异性抗体的方法，其特征在于，所述的步骤1）为：以6股、直径3mm、长1m的全棉绳索悬挂于猪群中间或围栏上，底端高度与动物肩部齐平，并将绳索的悬挂端解松，待猪群撕咬30min后，回收绳索，并置于无菌的样品收集袋中，用双手放在样品袋外挤出浸润在绳索上的唾液，并收集与无菌的50ml离心管中，以3000g离心15min，取上清，获得唾液一抗，保存备用。

3. 根据权利要求1所述的一种检测猪唾液中伪狂犬病毒gB蛋白特异性抗体的方法，其特征在于，所述的步骤5）为：将终止后的96孔聚苯乙烯反应板，放入预热的酶标仪中，读取各反应孔的OD405数值，并根据以下公式判定结果：S/P值=(样品OD-阴性对照OD)/(阳性对照OD-阴性对照OD)，S/P值≥0.2，判为阳性，对应群体阳性率≥80%；S/P值＜0.2，判为阳性，对应群体阳性率＜80%。