[发明专利]一种PCV2病毒样颗粒及其制备方法和裂解及VLP组装缓冲液

说明书

技术领域

本发明属于猪圆环病毒疫苗研究技术领域，具体涉及一种PCV2病毒样颗粒的制备方法、及该方法制备得到的病毒样颗粒，还有方法中用到的裂解及VLP组装缓冲液。

背景技术

猪圆环病毒二型（porcine circovirus type2,PCV2）属于圆环病毒科,直径约为17nm，无囊膜，二十面体对称，共价闭合环状单股DNA病毒。PVC2是引起仔猪断奶后多系统衰竭综合征（postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS）的主要病原，还会导致育肥猪皮炎与肾病综合征（porcine dermatis and nephropathy syndrome,PDNS）、猪呼吸道综合征（porcine respiratory disease complex,PRDC）、新生仔猪的腹泻病等综合征以及猪体内免疫抑制，很难进行有效的药物治疗，此外，PVC2常与诸多病原并发或继发感染，无疑为PVC2感染的准确诊断及有效防控增加了难度。PVC2该病毒目前已经在世界主要养猪生产大国的猪群中广泛传播，并已造成巨大的经济损失，建立高效预防方法对病毒的综合防控具有重要意义。

猪圆环病毒疫苗的研制成功于2006年并开始在北美应用，给全球养猪业带来了福音；2009年勃林格猪圆环病毒疫苗在中国首家注册成功和2010年第一个上市，2010年下半年国产疫苗的陆续上市。目前的亚单位疫苗就是将PCV2基因组中编码免疫原性蛋白的ORF2片段插入到昆虫杆状病毒中，通过培养昆虫杆状病毒而快速、大量获得具备免疫原性的PCV2核衣壳蛋白，再将其制备成疫苗。如勃林格殷格翰动物保健（美国）有限公司的FLEX系列茵格发猪圆环病毒疫苗和英特威/先灵葆雅动物保健公司的PCV2疫苗。还有一种是嵌合病毒灭活苗，原理是用PCV2的ORF2片段置换为不致病的PCVl中的0RF2片段，即获得了PCVl-PCV2嵌合病毒，具有与PCV2类似的免疫原性。辉瑞/富道动物保健公司研制的PCV2疫苗即是采用了这种技术。全病毒PCV2灭活疫苗，由于PCV2难培养、生长慢及难灭活，培养成本高，生产周期长，所以多数动物保健公司采用成熟的分子生物技术生产亚单位疫苗。目前在国外只有梅里亚动物保健公司生产全病毒灭活疫苗，适用于母猪免疫。已经注册的国产圆环病毒疫苗均为全病毒灭活疫苗。2010年分别由哈尔滨兽医研究所用LG株、南京农业大学用SH株研制而成的“圆克清”。由哈尔滨维科生物技术开发公司、上海海利生物药品有限公司生产出猪圆环病毒2型LG株全病毒灭活疫苗“圆毕净”；由洛阳普莱柯生物工程有限公司、江苏南农高科技股份有限公司生产出猪圆环病毒2型SH株全病毒灭活疫苗，2011北京大北农集团研发出“诸欢泰”。以上全病毒培养物在灭活前的病毒含量约10^5.5-6.0TCID₅₀/mL。应用的灭活剂为甲醛溶液（福尔马林）。在国际上应用PK-15传代细胞培养PCV2的最高含量很难超过10^3.5TCID₅₀/mL，而国内应用微载体细胞悬浮培养技术，使抗原效价提高了100多倍。抗原蛋白纯化是减少疫苗过敏反应的重要一环，国产疫苗亟待提高纯化工艺，以达到无超量杂质蛋白。

中国猪圆环病毒疫苗市场情况汇总