[发明专利]一种倭蜂猴粪便DNA提取方法无效
| 申请号： | 201410145177.0 | 申请日： | 2014-04-11 |
| 公开（公告）号： | CN103911370A | 公开（公告）日： | 2014-07-09 |
| 发明（设计）人： | 王政昆;朱万龙;张浩;高文荣;章迪;沐远 | 申请（专利权）人： | 云南师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 650500 云*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 倭蜂猴 粪便 dna 提取 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种倭蜂猴粪便DNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
①称取0.05g-0.10g在-20℃下冷冻保存的粪便，放入灭菌的2ml离心管中，加入1ml无水乙醇，振荡混匀1min，4℃10000r/min离心3min，倾去上清液，重复3-5次至上清无异色；
②加入1ml无菌双蒸水混匀，4℃10000r/min离心3min，倾去上清液，重复3-5次至上清无异色；
③加入500ul1％SDS，振荡混匀，55℃水浴10min，其间每3-4min取出混匀；
④取出离心管，4℃10000r/min离心5min；
⑤将上清液转移到另一个新的2ml离心管中，加入30ul0.5mol/LEDTA，20mg/ml的蛋白酶K10ul，振荡混匀，55℃水浴消化30min-1h；
⑥取出离心管加入等体积的酚25：氯仿24：异戊醇1，于10000r/min条件下抽提10min，取上清液；重复抽提2-3次；
⑦吸取约450ul上清液至一新的2ml离心管中加入1/10体积的3mol/L醋酸钠，1ml无水乙醇，-20℃放置20min，4℃12000r/min离心10min以沉淀DNA，倾去上清，加入500ul70%酒精洗涤DNA，12000r/min离心2min，室温下自然晾干，加入无菌双蒸水，-20℃保存。
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