[发明专利]研究脑内源性神经干细胞迁移、增殖、分化的方法

说明书

技术领域

本发明属于基础医学领域，具体地本发明涉及一种研究脑内神经干细胞的迁移、增值、分化等影响的方法。 

背景技术

帕金森病(Parkinson’s disease，PD)是一种常见的以黑质纹状体通路病变为主要特征的中枢神经系统进行性退变性疾病。目前PD的发病机制尚未明确，是多种机制协同作用的结果。临床上的疗法都不能从根本上阻止PD病人黑质纹状体通路的进行性退变，近来越来越多的人认为启动脑内源性神经干细胞参与脑损伤修复很可能发展成为一个崭新的治疗脑损伤的策略。这一治疗策略尤其适用于修复慢性脑损伤疾病-帕金森病。 

目前经典药物治疗如口服左旋多巴（L-dopa）在初期可以减轻或缓解症状，但并不能延缓病程的进展，且长期使用有明显的副作用，即L-dopa诱导的运动障碍。外科手术如深部脑刺激下丘脑核也只能暂时减轻或缓解症状。这些疗法都不能从根本上阻止PD病人黑质纹状体通路的进行性退变，启动脑内源性神经干细胞参与PD脑损伤修复是一个崭新的治疗慢性脑损伤的策略。 

神经发生就是指神经元发育的整个过程，从一个前体细胞分裂开始，一直到新的神经元成熟、整合并具有功能的过程。神经前体细胞能自我更新，但多处于静止状态。当CNS受损或变性时，细胞微环境发生改变，NSCs被激活，发生增殖、迁移、分化、整合，促进神经元再生及损伤部位脑组织结构和功能的恢复。成年脑有两个神经生发区，在那里神经再生比较活跃：一个是侧脑室傍边的脑室管膜下区（SVZ）；一个是海马的粒细胞下区（SGZ）。这两个部位神经干细胞所产生的未成熟的神经细胞（Neuroblast）有各自的传统迁移通路，SVZ所产生的未成熟神经细胞形成细胞簇，沿着嘴侧迁移流（RMS）迁移到嗅球、分化成中间神经元；SGZ 所产生的未成熟神经细胞则迁移到海马齿状回的粒细胞层，分化成中间神经元加入到神经回路中。揭示这些细胞迁移的分子机制和规律将会给引导这些细胞向脑损伤区迁移提供重要的理论依据。大量研究发现这两种细胞的共同特点是细胞表面均表达很高水平的唾液酸化神经细胞粘附因子。当这些细胞到达目的地、分化成成熟中间神经元后，细胞表面的PSA表达就会消失，提示PSA-NCAM在未成熟神经细胞定向迁移中起重要的作用。有实验表明如果将Endo-N注射到侧脑室，传统迁移通路RMS就会遭到破坏，SVZ所产生的未成熟神经细胞则向其他脑组织包括纹状体异位迁移明显增多。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种研究脑内源性神经干细胞迁移、增殖、分化的方法，为研究脑内源性神经干细胞迁移、增殖、分化等影响提供一种有效的方法。 

为实现上述目的，本发明提供的研究脑内源性神经干细胞迁移、增殖、分化的方法： 

1）对动物脑切片进行BrdU（5溴脱氧尿嘧啶）和DCX（双肾上腺皮质激素）、BrdU和NeuN（神经元核心抗原）、BrdU和GFAP（胶质细胞源性神经营养因子）双标免疫荧光染色，以及PSA-NCAM（唾液酸化神经细胞粘附因子）单标免疫荧光染色； 

2）使用GraphPad Prism6.0软件统计分析数据并绘图，BrdU阳性细胞为单因素多组数据使用one-way ANOVA分析。 

所述的方法中，动物脑切片经过以下处理：在脑右侧纹状体内立体定位注射6-OHDA（6-羟多巴胺）溶液后，在侧脑室注射Endo-N（PSA特异性裂解酶）原液，再腹腔注射BrdU溶液。 

所述的方法中，动物脑切片是指动物左右脑切片。 

所述的方法中，所述动物脑切片中包括有对照组脑切片。 

所述的方法中，所述对照组脑切片是立体定位注射6-OHDA溶液后，在侧脑室注射PBS缓冲液，再腹腔注射BrdU溶液。 

所述的方法中，所述动物脑切片腹腔注射BrdU溶液是连续注射数天。 

所述的方法中，所述统计分析数据的结果用平均值±标准误差（Mean±SEM）表示，以p<0.05作为在统计学差异的界限。 

本发明的方法可以用于研究神经干细胞的迁移特点，分析6-OHDA损伤的纹状体中的迁移来的细胞的分化能力，为进一步深入研究如何启动脑内源性神经干细胞迁移、增殖、分化等影响奠定了重要的工作基础。 

附图说明

图1是本发明一个实施例的方法研究路线。