[发明专利]产L-丙氨酸且耐受自来水的菌株及构建方法

权利要求书

1.一种构建重组菌的方法，包括如下步骤：将出发菌染色体上的clpA蛋白编码基因替换为clpA*蛋白的编码基因，得到的重组菌；

所述clpA*蛋白的氨基酸序列为将所述clpA蛋白氨基酸序列的第632位异亮氨酸I突变为丝氨酸S。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述clpA*蛋白编码基因为将所述clpA蛋白编码基因核苷酸序列第1895位的碱基为T突变为G得到的基因。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：

所述clpA*蛋白编码基因的核苷酸序列为序列表中序列2自5’末端第1-2272位核苷酸。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：

所述将出发菌染色体上的clpA蛋白编码基因替换为clpA*蛋白编码基因为将含有所述clpA*蛋白编码基因的DNA片段Ⅱ同源重组到所述出发菌中。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：

所述DNA片段Ⅱ的核苷酸序列为序列表中序列2。

6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述出发菌为通过将嗜热脂肪地芽孢杆菌染色体上的L-丙氨酸脱氢酶基因整合在大肠杆菌ATCC8739染色体的乳酸脱氢酶处，再依次敲除所得大肠杆菌染色体的丙酮酸甲酸裂解酶基因、乙醇脱氢酶基因、乙酸激酶基因、富马酸还原酶基因和丙氨酸消旋酶基因，然后在发酵罐中连续传代培养而得的基因工程菌；

所述出发菌具体为大肠杆菌XZ-A26CGMCC No.4036。

7.由权利要求1-6中任一所述的方法制备的重组菌。

8.权利要求7所述的重组菌在产生和/或提高L-丙氨酸中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述产生和/或提高L-丙氨酸为将权利要求7所述的重组菌在自来水作为溶剂配制的发酵培养基中发酵生成。

10.一种产生L-丙氨酸的方法，其特征在于：在自来水作为溶剂配制的发酵培养基中发酵权利要求7所述的重组菌，收集发酵产物，即得到L-丙氨酸。