[发明专利]一种动态实时测量细胞膜电位的方法

权利要求书

1.一种动态实时测量细胞膜电位的方法，所述方法包括如下步骤：

1）将从已获得的人体脐带静脉血中分离出来的细胞在体外进行培养；

2）将所述培养后的细胞注入到微流室中继续进行培养；

3）利用微注射泵在微流室中进行精确的流量控制；

4）利用所述微流室内的氮化镓（GaN）高电子迁移率晶体管（HEMT）器件测量流体表面的粘滞度，进而计算出细胞膜电位。

2.根据权利要求1所述的方法，需要将所述微流室、微注射泵和储液瓶依次连接，构成一个封闭的循环系统；所述微流室作为液体流动和细胞注入之用，所述微流室内的液体通过所述微注射泵传输给所述储液瓶，所述作为生物传感器的HEMT器件与所述微流室耦合，用于检测所述微流室内细胞在动态条件下的实时细胞膜电位。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述的从已获得的人体脐带静脉血中分离细胞的方法为：

1）在无菌条件下，将已获得的新鲜的人体脐带静脉血加入1g/L胶原酶和2.5g/L胰蛋白酶(1:1)(V/V)的混合液15mL，置于37℃水浴箱中孵育8min；

2）将步骤1）得到的液体收集入离心管，用磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗脐静脉2次，将冲洗后的液体一同收集入离心管，1000r/min离心10min，取上清液，加入完全培养液重悬细胞；

3）取0.1mL细胞悬液用4g/L台盼蓝染色后作活细胞计数；

4）将2×104/L细胞接种到24孔板中，每孔加入完全培养液1mL，置于37℃、950mL/L O2、50mL/L CO₂培养箱内静置培养，并采用台盼蓝排斥法，将0.1mL混匀的内皮细胞悬液与4g/L台盼蓝0.9mL混匀后，取1滴在显微镜下计数100个细胞。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述的将已分离活体细胞注入到微流室内继续培养的方法为：用酒精对HEMT器件消毒后，使用纤连蛋白溶液（fibronectin）进行处理30min，并使用PBS冲洗，然后接种细胞，使细胞密度达到5000～12000cells/mm²，并保证细胞全程置于含5%CO₂的37℃恒温箱中。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述的利用微注射泵在微流室中进行精确的流量控制的方法为：采用微注射泵与细胞膜电位检测装置连接形成血液动力系统，该系统架设在37℃恒温箱中维持温度稳定，实验中使用PBS作为流体，并且实验全程通入含5%CO₂的空气以保持流体环境的酸碱度。