[发明专利]测定柴胡皂苷a含量的时间分辨荧光免疫分析法及试剂盒

权利要求书

1.一种测定柴胡皂苷a含量的时间分辨荧光免疫分析法，其特征在于，以兔抗鼠IgG包被96孔酶标反应板，与样品中的柴胡皂苷a竞争结合抗柴胡皂苷a的单抗，用稀土离子Eu³⁺标记SSa-HSA复合物作为示踪物，以增强液作为发光增强系统，利用间接竞争时间分辨荧光免疫分析法，测定所述样品中的柴胡皂苷a含量。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)以兔抗鼠IgG包被96孔酶标板，4℃反应过夜；

(2)常温振荡，洗涤液清洗，常温封闭，清洗，拍干；

(3)配制柴胡皂苷a标准品或待测样品，溶剂为20％甲醇水，每孔加入标准品或待测样品，浓度分别为0ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、250ng/ml，2000ng/ml、5000ng/ml；再加入以稀释缓冲液1∶4000倍稀释的抗柴胡皂苷a皂苷单克隆抗体溶液和1∶800倍稀释的标记抗原复合物，贴封膜，常温下振荡反应；

(4)清洗，拍干，加入增强液，振荡后，用荧光免疫分析仪Victor1420测定其荧光信号；

(5)测得标准品的荧光值，建立标准曲线；测得待测样品的荧光值即得为样品的柴胡皂苷a含量。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法以稀土离子Eu³⁺标记SSa-HSA复合物作为示踪物，并用增强-解离系统扩大荧光信号。

4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法的检测灵敏度为0.006ug/ml。

5.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法的含量检测范围为10-5000ng/ml。

6.一种试剂盒，用于测定柴胡皂苷a含量的时间分辨荧光免疫分析方法，其特征在于，包括：酶标包被板，标准品，抗柴胡皂苷a单克隆抗体，铕标记复合物，洗涤液，稀释液，增强液。

7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述标准品的浓度分别为0ng/ml、10ng/ml、50ng/ml、250ng/ml，2000ng/ml、5000ng/ml，加样量25ul/孔；测定前，以稀释液将抗柴胡皂苷a单克隆抗体4000倍和铕标记复合物800倍稀释，按先后顺序加入100ul/孔；增强液的加液量为200ul/孔。