[发明专利]一种中华鳖早期性腺石蜡切片的制作方法

权利要求书

1.一种中华鳖早期性腺石蜡切片的制作方法，包括①样品固定、②脱水与透明程序、③透蜡和包埋、④切片和展片、⑤染色与封片，其特征在于：将步骤①中的样品包埋于经固定液预处理的豆制品中。

2.根据权利要求1所述的中华鳖早期性腺石蜡切片的制作方法，其特征在于：所述豆制品的预处理包括如下步骤：先将豆制品进行切块处理，切成厚度为3mm～2cm的方型平板状，然后再切成截面积为0.5cm²～6cm²的细条，用固定液固定6h～96h后在0.1%～10%的盐酸溶液中浸泡0.5h～96h，最后在流水中冲洗后浸泡于50%～80%的酒精溶液中。

3.根据权利要求1所述的中华鳖早期性腺石蜡切片的制作方法，其特征在于：所述步骤①～⑤的具体处理如下：

①样品固定：收集中华鳖胚胎发育中后期胚胎的性腺-中肾-肾上腺的复合体，将取出的复合体立即投入到固定液中固定，固定0.5h～24h之后转移到50～80%酒精溶液中保存；

②脱水与透明程序：将步骤①的中华鳖性腺预包埋于经固定液预处理的豆制品中并用梯度乙醇脱水；先后采用70％乙醇浸泡1min～60min、80%乙醇浸泡1min～60min、90%乙醇浸泡30s～30min、100％乙醇浸泡1min～60min；然后用体积比为1:1的无水乙醇：二甲苯过渡处理20s～40min，再用二甲苯浸泡处理20s～40min，使之透明；

③透蜡和包埋：用体积比为1:1的二甲苯：石蜡过渡处理30s～10min，56℃～70℃熔点的石蜡透蜡20min～40min，2次；将脱水透蜡后的组织样品进行包埋；

④切片和烤片：用切片机切片，切片厚度控制在4μm～15μm，经35℃～45℃水浴中进行展片，载玻片捞片后放置于35℃～40℃烤片机上进行烤片固定；

⑤染色与封片：染色采用伊红-苏木精复染方法，其中用苏木精染色10s～5min伊红染色5s～5min；然后用中性树胶封片。

4.根据权利要求3所述的中华鳖早期性腺石蜡切片的制作方法，其特征在于：在进行所述步骤⑤染色之前还进行脱蜡复水，其中脱蜡步骤具体为：先用二甲苯浸泡1min～15min，再用体积比为1:1的无水乙醇：二甲苯过渡处理1min～3min；复水步骤具体为：先后采用100%乙醇浸泡30s～30min、90%乙醇浸泡30s～30min、70%乙醇浸泡30s～30min、50%乙醇浸泡30s～30min、最后用流水冲洗。

5.根据权利要求3所述的中华鳖早期性腺石蜡切片的制作方法，其特征在于：所述的苏木精染液配方为：1g苏木精溶于100mL无水乙醇中，20g明矾溶于200mL蒸馏水中，两液混合，加热沸腾3min，稍冷却加入0.51g氧化汞，溶解后即得到苏木精染液。

6.根据权利要求3所述的中华鳖早期性腺石蜡切片的制作方法，其特征在于：所述的伊红染液为1％的伊红溶液，用70％乙醇溶解。

7.根据权利要求1所述的中华鳖早期性腺石蜡切片的制作方法，其特征在于：所述步骤①固定液为4%的多聚甲醛、福尔马林或波恩氏液。

8.根据权利要求1所述的中华鳖早期性腺石蜡切片的制作方法，其特征在于：所述豆制品为硬度较高的豆腐或素鸡。