[发明专利]一种从咸水卤虫卵中提取四磷酸二鸟苷的方法

说明书

技术领域

本发明涉及超临界流体萃取技术领域，特别涉及一种化妆品原料的制备方法，从咸水卤虫(Artemia Salina)卵中提取四磷酸二鸟苷 (GP4G)的方法。

背景技术

咸水卤虫(Artemia Salina)是海洋浮游生物中的一种，早在恐龙年代就存活于地球上，咸水卤虫卵中含有较高浓度的四磷酸二鸟苷。

四磷酸二鸟苷（Diguanosine Tetraphosphate) 为4个磷酸基结合于两个鸟苷的化合物（GPPPPG），简称GP4G，可水解转化成三磷酸腺苷（ATP），为细胞供给能量。四磷酸二鸟苷目前作为一种功能性原料应用于化妆品行业，GP4G对人体肌肤细胞的独特功效有，（1）补充细胞能量，唤醒休眠细胞，直接快速地补充细胞能量；（2）激活肌肤细胞的各种生理活动及新陈代谢，加速各种保持肌肤健康状态起到关键作用的蛋白的合成；（3）可促进真皮层成纤维细胞分裂增殖，使胶原纤维、网状纤维和弹性纤维增加，调节基质中胶原酶、透明质酸、硫酸软骨素、肝素的含量和活性，维持肌肤真皮结缔组织中的水分，使结缔组织处于疏松状态，防止胶原蛋白由溶解状态变为不溶解状态，从而防止皱纹的产生，并有效修复已经形成的皱纹；（4）保护及修复肌肤细胞的基因免受外界环境因素的损伤，增强肌肤细胞抵抗力，保持肌肤柔软光滑，能够强烈保护DNA的三维立体螺旋结构，并在其结构受到损伤时，对它进行有效的修复；（5）能有效俘虏自由基，抑制黑色素的形成，抵御自由基造成的肌肤老化，促进肌肤活力；能够有效修复自由基对细胞造成的损伤，对肌肤暗沉有明显的改善。

目前有报道的关于GP4G 的提取方法见于F.J.FINAMORE 和A.H.WARNER 于1963年在The Journal of Biological Chemistry 发表的文章The occurrence of P1，P4~Diguanosine 5’-Tetraphosphate in Brine shrimp eggs中生产操作步骤复杂，而专利CN101857623A《一种从生物体中提取GP4G的方法》生产过程中产生大量废液，每处理1kg样品，大概约产生20L酸碱废液，后处理麻烦，不利于环境保护。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提一种操作简单、环保、制备过程无废液产生的从咸水卤虫卵中提取四磷酸二鸟苷的方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种从咸水卤虫卵中提取四磷酸二鸟苷的方法，其特征在于采用以下步骤：

A、先将咸水卤虫卵在40~45℃烘箱中预先烘干，将咸水卤虫卵与无水乙醇按质量比1:1~10的比例混合均匀，将混合液在常温、70~150Mpa压力下通过高压均质机进行破壁处理，将混合液通过300目过滤网除杂，然后将所得混合液在冻干机中冷冻干燥，得咸水卤虫卵粉块；

B、称步骤A所得咸水卤虫卵粉块，装入超临界萃取釜中，在超临界萃取釜的入口和出口设置滤纸或脱脂棉，阻止萃取时粉块穿过超临界萃取釜的过滤板，萃取温度为40~50℃，萃取压力为30~45Mpa，乙醇作为夹带剂，乙醇的添加量为萃取釜中咸水卤虫卵粉块质量的5~10%，CO₂的流量控制在200~400L/h, 萃取时间2~3h；分离釜温度为20~30℃，分离压为5Mpa，回收乙醇，冷冻干燥后获得粉状物。

本发明提供的制备方法简单可行，首先通过高压均质机对咸水卤虫卵进行预处理，将咸水卤虫卵进行粉碎，然后采用超临界CO₂萃取技术，萃取咸水卤虫卵粉块中的四磷酸二鸟苷 (GP4G)，最后冷冻干燥得粉状物，萃取得率在70%~75%之间， 远高于The occurrence of P1，P4~Diguanosine 5’-Tetraphosphate in Brine shrimp eggs论文中所述方法的萃取得率（得率为10%）和专利CN101857623A《一种从生物体中提取GP4G的方法》的萃取得率（得率为50%）。经高效液相色谱法测定本发明制备的粉状物，GP4G的纯度不低于为85%。超临界萃取过程中使用乙醇为夹带剂，安全、环保、可回收。传统提取方法需要经过原料预处理、脱水、破碎、浸取、中和、吸附、洗脱、脱盐和真空浓缩等工艺过程，其四磷酸二鸟苷 (GP4G)的收率低，纯度低，设备要求条件高，生产成本高，不利于工业化生产。

本发明具有绿色环保、无三废排放、收率高、萃取得率在70%~75%之间，纯度不低于85%，生产成本低，有利于工业化生产的优点。

具体实施方式