[发明专利]一种甲型流感病毒胶体金诊断检测试纸及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及检测试纸，特别是一种甲型流感病毒胶体金诊断检测试纸及其制备方法。

背景技术

流行性感冒简称流感，是由流感病毒引起的一种常见的急性呼吸道传染病，以冬春季多见，临床以高热、乏力、头痛、全身酸痛等全身中毒症状重而呼吸道症状较轻为特征。据2002年世界卫生组织公布的数据，估计全球每年流感病例达6亿-12亿。从上世纪初至今，有六次全球性流感大流行，分别是1918年“西班牙流感”、1957年“亚洲流感”、1968年“香港流感”、1977年“俄罗斯流感”、1999年-2000年的欧洲流感大流行事件以及2009年的“墨西哥流感”，每次流感大流行都导致数百万以上的人死亡。除了这六次全球性流感疫情外，流感每年都会发生不同规模的小流行，尽管在波及范围、死亡人数等方面都不像以上六次流感疫情如此严重，但是对当地人民的生命财产和经济发展都带来了严重不良影响。如1976年美国新泽西因一名青年染上猪流感而引发了社会对爆发新疫症的恐慌，于是开始大规模推行疫苗注射；再如1997年在香港爆发的H5N1禽流感疫情，不仅可以在禽类中传播，还引起了人际间的传播，香港受感染的人数为18人，其中6人死亡。由于这次疫情香港政府下令宰杀150万只鸡，对香港的经济带来巨大的冲击。

流感的流行给人民的生命和财产带来了巨大的威胁，造成了较严重的社会影响，快速检测试剂盒，可以在流感病毒流行时，在机场、海关等现场快速检测、确定感染流感病毒的病人，为病人的治疗和隔离防控提供依据。也可用于猪及家禽的流感病毒流行监测，对流感病毒流行的防控具有重要意义。

流行性感冒是国家卫生部认定的乙级传染病之一。继SARS之后，我国卫生部组织制定了《卫生部应对流感大流行准备计划与应急预案》，要求政府相关部门每年都要储备大量的流感诊断检测试剂；同时，医院每年对呼吸道检测试剂需求量约3亿人份，而且这个数量还在不断增加中。因此流感病毒检测试剂盒作为常规检测工具在各个医疗检测窗口诊断中应用越来越多。

随着世界经济一体化的深入，全球人口流动性增加，海关、边境、机场、车站等重要的人口集散地是各国、各地区防控传染病的重要关卡。如我国卫生部甲型HlN1流感临床专家组对我国20个省市的6l家医疗机构于2009年5月10日至6月30日期间的426例新型甲型H1Nl流感患者调查统计发现，有32.9%的患者于口岸筛查时发现；20.2%的患者因密切接触甲型H1Nl确诊者而隔离，并于密切观察期间发病。因此就需要一种尽可能不受实验环境、实验设备和实验人员操作水平等因素影响的流感病毒现场快速检测试剂盒用于海关、机场、车站等重要人口集散地，甚至是野外、农场、社区、住户等疫情感染终端人群的疫情监测。

流感病毒是一种变异速率非常快的RNA病毒，自然界中像流感病毒这样变异频繁、变异幅度大的生物是少有的。在流感病毒的8个基因中，HA变异最快，其次是NA。如甲型流感病毒的HA基因每年每个核苷酸变异的概率为3～4×10-3，而细胞染色体DNA的突变率仅为10-8～10-10。流感病毒的易变异性造成了流感三年小流行、十年大流行的流行规律。而且每当因病毒抗原变异而出现新的病毒品种时，原有的检测方法和预防手段失效而不能及时控制疫情的发生和传播，造成了流感的大流行。以禽流感为例，1968年以来所发生的流行事件的不只是H5N1亚型毒株，还包括有H7N2，H7N3，H7N7和H9N2毒株等它们均可以感染人类。因此流感病毒检测工作越及时、检测结果越可靠，流感防控工作的效果也越好。

目前实时荧光定量PCR 方法是检测流感病毒灵敏度和准确率都比较高的方法，该方法在许多国家和地区已经是鉴定流感感染阳性病例的确诊性方法。但是实时荧光定量PCR方法的实验检测条件限制了该方法只能用于流感病毒的最终实验室确定性检测。而敏感度、准确率低于实时荧光定量PCR技术的免疫胶体金技术、酶联免疫检测技术等方法由于操作简便、成本低廉、对实验条件要求低等特点被广泛应用在流感病毒检测的第一线。但是，目前市场上销售的流感病毒免疫胶体金检测试剂盒区分甲型或者乙型流感病毒用的是抗流感病毒核蛋白的单克隆抗体，优点在于可以很好地区分甲型和乙型流感病毒，但缺点在于核蛋白位于病毒核心内，临床标本直接检测敏感度低，容易出现漏检。流感病毒血凝素位于流感病毒表面，是进行快速检测的理想靶点，但是由于流感病毒血凝素易于突变，常用于作为流感病毒亚型分类的依据，是否可以制备出与甲型各亚型均反应的型特异性抗体，制备出高敏感性的快速检测试纸是本领域技术人员亟需解决的技术问题。

发明内容