[发明专利]一种条斑紫菜种质固相保存方法

说明书

技术领域

本发明属于种质保存领域，特别涉及一种条斑紫菜种质固相保存方法。

背景技术

条斑紫菜具有叶状体和丝状体两个异型世代，丝状体在贝壳等基质中萌发、生长、发育称贝壳丝状体，丝状体在培养液中悬浮称为自由丝状体。条斑紫菜自由丝状体在人为控制的条件下，能长期保持不生长和不发育的状态，因此可以把条斑紫菜自由丝状体作为种质长期保存。但迄今为止未见报导比较可靠的方法，目前基本采用的条斑紫菜种质保存方法是将得到的条斑紫菜种质于广口瓶等容器中，无控温、控光及其它技术的系统管理，特别是至今未见有关紫菜种质固相保存方法报导，专利申请人从2000年开始进行了专门研究，不断总结改进，形成了成熟的紫菜种质一级固相保存方法，紫菜种质一级固相保存方法不仅能使种质长期保持不生长发育，且不易受其它杂藻和病菌污染。特别是3年继代保存，大大减少了保存管理中工作量，是一种高效、防污染能力强的好方法。目前一级固相保存条斑紫菜种质800多品系，种质状态良好。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种条斑紫菜种质固相保存方法，该保存方法科学实用，可操作性强；保存中能有限防止细菌、杂藻的污染，使紫菜种质更加安全。

本发明的一种条斑紫菜种质固相保存方法，包括：

在无菌操作台内，将条斑紫菜的种质藻球1个～2个，插入保存管内的保存基斜面下1cm～1.5cm处，然后加入保存液1ml～1.5ml；保存管加盖，用封口胶封口，编号；保存管插入保存架，保存架置于保存箱内；保存管理。

所述无菌操作台内需控制温度3℃～5℃。

所述条斑紫菜的种质藻球为条斑紫菜自由丝状体形成的纯净藻球。

所述保存管为10ml玻璃试管。玻璃试管用盐酸浸泡后，清洗干净并烘干，在高温灭菌锅消毒。

所述保存基，为固相琼脂培养基，并为斜面，琼脂培养基琼脂含量为1.0%～1.5%。所述固相琼脂培养基的制备方法：1000ml消毒海水中加入加琼脂粉10～15g，加温充分溶解、并煮沸5分钟，制成含1.0%～1.5%琼脂培养液，然后用移液管将5ml琼脂培养液移入10ml玻璃试管中，试管倾斜30度，冷却（5～10℃），制成固体斜面培养基，加盖，固相琼脂培养基即得。

所述保存液为消毒海水1000ml中加入PES营养母液5ml配制而成。

保存液配制：黑暗沉淀40天的自然海水，加淡水调制到比重为1.018海水（20℃），200目筛绢双层过滤，然后调制海水盛入5000ml锥形玻璃烧瓶中，加温至100℃，煮沸8分钟～10分钟，冷却后，1000ml消毒海水中加PES营养母液5ml充分混均，瓶口用保鲜膜密封待用，即得。

所述PES营养母液盐配制：PES营养母液由Ⅰ液和Ⅱ液混合配制而成，Ⅰ液和Ⅱ液均用蒸馏水配制。Ⅰ液配制，6种溶液分别配制，NaNO₃溶液配制，35g NaNO₃加入到100ml蒸馏水中，完全溶解，即得，配制同法，β-甘油磷酸钠(Na₂glycerophosphate)5g/100ml，VB₁₂1mg/100ml,VB₁1mg/100ml，生物素(VH)0.5mg/100ml,，缓血酸铵(Tris buffer三羟甲基氨基甲烷)500mg/100ml。Ⅱ液配制，在1000ml蒸馏水中，加入Na₂EDTA1.45g完全溶解后，依次加入CoSO₄·7H₂O4.8mg、ZnSO₄·7H₂O22mg、MnSO₄·4H₂O164mg、FeSO₄·7H₂O500mg、FeCl₃·6H₂O49mg、H₃BO₃1.14g，全部完全溶解（为了完全溶解，加热至50℃左右）。Ⅰ液和Ⅱ液配制完成，静置24h小时后，在Ⅱ液250ml+Ⅰ液各10ml，混均，PES营养母液即得。

所述保存箱为低温食品保存箱，封闭式，能够调节和控制温度，光照等。

所述保存管理：保存箱内温度为5℃～8℃、光照强度为80Lx～100Lx、光周期为12L：12D，防止污染等，一年更换一次保存液，三年继代保存。

有益效果