[发明专利]Lycium exsertum组织培养及快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明属于植物组织培养领域，具体涉及Lycium exsertum组织培养及快速繁殖方法。

背景技术

茄科枸杞属Lyciumexsertum是从美国引进的茄科枸杞属植物，主要分布在亚利桑那沙漠地区，其进化程度高于我国的枸杞。在生殖进化上，已经由雌雄同体和自交不亲和的二倍体进化到自交亲和的多倍体阶段，而我国仍处在自交不亲和的二倍体进化阶段。该种枸杞的引进对于我国枸杞的种质资源的改良有很大的意义。该种枸杞引进后面临的首要问题是进行扩大繁殖。

发明内容

本发明的目的是提供一种Lycium exsertum组织培养及快速繁殖方法，以解决引进枸杞的繁殖问题。

本发明技术方案如下：本发明种子为茄科枸杞属（Lycium exsertum）购于美国的S&S SEEDS,INC.联系方式为P.O. BOX 1275 CARPINTERIA AVE CARPINTERIA,CA 93013,USA。

一种Lycium exsertum组织培养方法，具体步骤如下：

A、外殖体处理采用Lycium exsertum幼嫩茎段作为外殖体，剪去叶片，留少量叶柄，每2-3个芽剪成一段，将茎段洗去污渍，后用水冲洗干净，冲洗时间为5-10min，然后将其放入超净工作台中,进行消毒，消毒后剪去茎段两端，放于培养皿中备用；

优选的，消毒的最佳方案如下：先用75%酒精振荡消毒5s，再用0.1 %升汞溶液消毒6—6.5分钟，最后用无菌水清洗3-4次； 

B、初代培养

以MS培养基为基础培养基，添加不同类型的激素及数量进行初代培养。通过初代培养可以获得所繁育物种的无菌材料。这一阶段的培养效果依植物种类及培养基成分而异，可能形成一个芽或多个芽。

优选的，添加0.05mg/L的萘乙酸（NAA）、3%蔗糖和4g琼脂，使用NaOH或HCl将培养基pH值调至5.8。培养条件是光强为3000lx全光照24h，温度为：25℃，湿度为70%RH。

C、继代培养

在初代培养的基础上获得的芽苗数量不多，还需进一步扩大繁殖，才能发挥组织培养快速繁殖的优势。

通过对L.exsertum的最佳培养基的筛选，培养材料为初代培养获得的单苗或丛芽，以MS为基本培养基，添加6-苄氨基腺嘌呤与吲哚-3-乙酸。

优选的，继代培养基主要成分以及培养条件如下：以MS培养基为基础培养基，添加0.1 mg/L的6-苄氨基腺嘌呤和0.05 mg/L的吲哚-3-乙酸，使用NaOH或HCl将培养基pH值调至5.8；培养条件是光强为3000lx全光照24h，温度为23℃，湿度为70%RH。

优选的，所述6-苄氨基腺嘌呤和0.05 mg/L的吲哚-3-乙酸的浓度比为2:1时，芽分化系数最高，生长最旺盛。

D、生根培养

继代培养扩大繁殖后进行生根诱导获得完整再生的植株。

生根培养有三种优选方案：方案一、所述步骤D生根培养条件：使用步骤C继代培养植株叶片为材料，以1/4的MS培养基为基础培养基，添加1.5%蔗糖和4g琼脂，使用NaOH或HCl将培养基pH值调至5.8；培养条件是光强为3000lx下12h光暗交替，温度为23℃，湿度为70%RH。

方案二、使用步骤B的培养植株叶片为材料进行丛芽增殖培养，

方案三、使用步骤C的培养植株叶片为材料进行丛芽增殖培养，方案二和三的培养条件：以1/2MS培养基为基础培养基，添加1.0 mg/L的6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）、0.5 mg/L的吲哚丁酸（IBA）；培养条件是先在25℃下暗培养7d，然后在25℃、光强为3000lx全光照，湿度为70%RH下培养至丛芽长出。此条件下丛芽增殖系数最高，生长最旺盛，增殖系数能达到5.0以上。

E、炼苗移栽

炼苗：将生根培养的苗木在与移栽环境相同的条件下闭瓶炼苗5-7d，让组培苗逐渐适应外界条件。

移栽：炼苗移栽基质以泥炭、蛭石、珍珠岩1：1：1混合配制，将苗子移栽到装有基质的花盆中，浇透水后，覆膜。

优选的，炼苗移栽对基质用0.1%多菌灵浇透，移栽时将炼好苗的植株的根部浸入0.1%多菌灵和0.1 g/Ld的NAA混合溶液中浸泡10min。