[发明专利]一种紫花苜蓿中苜草素活性成分的分离方法

说明书

技术领域

 本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种紫花苜蓿中苜草素活性成分的分离方法。 

背景技术

苜草素为一种苜蓿提取物，以黄酮、皂苷和苜蓿多糖为其主要活性成分。苜蓿多糖具有免疫调节，抗肿瘤、抗病毒、抗辐射、延缓衰老、抗感染等药理作用，还能改善动物生产能力，且对基体的毒副作用小。苜蓿黄酮，在一定计量范围内对禽畜的有明显的促进生长、提高繁殖力和增强机体免疫力等作用，对人体具有抗肿瘤、延缓衰老、增强心血管功能的作用，还有治疗慢性前列腺炎、增强免疫力、调节内分泌系统、护肝、抗过敏，抑菌、抗病毒等功能。苜蓿皂甙从苜蓿中提取的一种很好的活性物质，具有独特的生物学性质，是由糖中羟基或非糖类化合物的羟基以缩醛链（甙链）脱水缩合而成的环状缩醛物，其结构为五环三萜烯类化合物，苜蓿皂甙具有降低胆固醇的效用，可应用于家族性高胆固醇血症的治疗，可以抑制在胆固醇在肠道的吸收，可防治心脑血管疾病、降压、抗菌、消炎、减热、镇静，抗癌、强壮等方面的药理作用。 

在苜草素的分离过程中，活性物质采用各自提取的方式进行，为此消耗了大量资源。只提取苜草素，但活性组分未分离其，使用时无法根据情况调整活性组分含量，不满足精细化生产的要求。 

发明内容

 本发明的目的是克服现有技术的缺陷，提供一种紫花苜蓿中苜草素活性成分的分离方法。 

本发明的目的是通过以下技术方案实现的： 

（a）将紫花苜蓿干燥粉碎后，先采用乙醚浸泡，然后分离除去乙醚；

（b）向步骤a的产物中加入蒸馏水，煮沸回流提取2~3次，提取时间1~2h，合并提取液I，分离残渣；

（c）向步骤b中的残渣中加入60%~70%的甲醇，回流提取2~4次，提取时间1.5~2h，合并提取液II浓缩至无醇味；

（d）将步骤b的提取液I浓缩1/2体积，将浓缩物倒入甲醇中，析出，分离得沉淀物，沉淀物用乙醚洗涤2次，得苜草素活性物之一苜蓿多糖，分离滤液浓缩至无醇味；

（e）将步骤d的滤液浓缩物加入蒸馏水，用正丁醇萃取3次，萃取夜浓缩1/2体积，倒入乙酸乙酯中，析出，分离沉淀物，沉淀物用乙醚洗2次，得苜草素活性物之一苜蓿皂甙；

（f）将步骤c的浓缩物用甲醇溶剂，采用S-8大孔树脂柱，先用纯水洗脱，然后采用甲醇：水（体积比4：1）洗脱，浓缩干燥得到苜草素活性物之一苜蓿黄酮。

进一步地，步骤a乙醚的浸泡时间为0.5~1h。 

进一步地，步骤b中回流提取的温度70℃。 

进一步地，步骤e中可用戊醇替代正丁醇。 

本发明的有益效果是：采用同一生产流程，分别将苜草素活性成分进行分离，能减少各自分离提取时消耗溶剂，减小能耗，且活性成分有效分离，有利于根据使用要求和效果调整各活性组分之间的含量。 

具体实施方式

为了使本发明的目的及技术方案的优点更加清楚明白，以下结合实例，对本发明进行进一步详细说明。 

实施例1： 

将紫花苜蓿干燥粉碎后，先采用乙醚浸泡，然后分离除去乙醚。向乙醚浸泡产物中加入蒸馏水，煮沸回流提取2次，提取时间1h，合并提取液并浓缩1/2体积，分离残渣。将浓缩物倒入甲醇中，析出，分离得沉淀物，沉淀物用乙醚洗涤2次，得苜草素活性物之一苜蓿多糖，分离滤液浓缩至无醇味。滤液浓缩物加入蒸馏水，用正丁醇萃取3次，萃取夜浓缩1/2体积，倒入乙酸乙酯中，析出，分离沉淀物，沉淀物用乙醚洗2次，得苜草素活性物之一苜蓿皂甙。向蒸馏水煮沸回流的残渣中加入60%~70%的甲醇，回流提取2次，提取时间1.5h，合并提取液浓缩至无醇味。浓缩物用甲醇溶剂，采用S-8大孔树脂柱，先用纯水洗脱，然后采用甲醇：水（体积比4：1）洗脱，浓缩干燥得到苜草素活性物之一苜蓿黄酮。

实施例2： 

将紫花苜蓿干燥粉碎后，先采用乙醚浸泡，然后分离除去乙醚。向乙醚浸泡产物中加入蒸馏水，煮沸回流提取3次，提取时间2h，合并提取液并浓缩1/2体积，分离残渣。将浓缩物倒入甲醇中，析出，分离得沉淀物，沉淀物用乙醚洗涤2次，得苜草素活性物之一苜蓿多糖，分离滤液浓缩至无醇味。滤液浓缩物加入蒸馏水，用正丁醇萃取3次，萃取夜浓缩1/2体积，倒入乙酸乙酯中，析出，分离沉淀物，沉淀物用乙醚洗2次，得苜草素活性物之一苜蓿皂甙。向蒸馏水煮沸回流的残渣中加入60%~70%的甲醇，回流提取4次，提取时间2h，合并提取液浓缩至无醇味。浓缩物用甲醇溶剂，采用S-8大孔树脂柱，先用纯水洗脱，然后采用甲醇：水（体积比4：1）洗脱，浓缩干燥得到苜草素活性物之一苜蓿黄酮。