[发明专利]分泌抗大麦黄矮病毒GAV株系单抗杂交瘤细胞株及其单抗应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种分泌抗大麦黄矮病毒GAV株系单克隆抗体杂交瘤细胞株及其单抗的应用。 

背景技术

小麦黄矮病是由大麦黄矮病毒（Barley yellow dwarf virus ,BYDV）引起的，该病害在全世界均有分布，它的寄主广泛，可寄生150多种单子叶植物，特别是侵染大麦、小麦、燕麦、水稻等多种禾谷类作物。1950年在美国加利福尼亚州的大麦上首先发现，是世界上危害最严重、流行最广泛的植物病毒之一。我国于1960年在陕西、甘肃的小麦上发现，是小麦最重要的病毒病害，被称为小麦的“黄色瘟疫”，“小麦癌症”。目前主要分布在西北、华北、东北、华中、西南及华东等冬麦区、春麦区及冬春麦混种区，除危害小麦外，还能侵染大麦、莜麦、粟、糜子、玉米、水稻和禾本科杂草。受害小麦一般减产40%左右，严重的可达70%以上。我国20世纪60年代以来，曾于1966、1968、1970、1973、1978、1980和1987年大流行。在陕西、甘肃、宁夏、山西和内蒙古等省、自治区造成小麦严重减产。这类病毒除了在经济上的重要性外，它们的基因表达机制、进化与传播介体和寄主的作用机制，几十年来一直被研究者所关注。 

小麦黄矮病的症状因寄主种类、品系、生长期及生理条件、病毒株系、接种剂量和环境条件等因素的不同而有差异。寄主植物受黄矮病毒侵染后，苗期感病植株生长缓慢、分蘖减少、扎根浅、易拔起。病叶自叶尖褪绿变黄，叶片厚硬。病株越冬期间易被冻死，未冻死的返青拔节后新生叶片继续发病。病株矮化、不抽穗或抽的穗很小。拔节孕穗期感病的植株较矮，根系发育不良。典型症状是新叶从叶尖开始发黄，随后出现与叶脉平行，但不受叶脉限制的黄绿相间的条纹，沿叶缘向叶茎部扩展蔓延，黄化部分约占全叶的1/3-1/2。病叶质地光滑，后期逐渐黄枯，而下部叶片仍为绿色。病株能抽穗，但籽粒秕瘦。穂期感病的植株一般只旗叶发黄，呈鲜黄色，植株矮化不明显，能抽穗，粒重降低。大麦幼苗期感病后严重矮缩，分蘖增多，叶片变硬发脆，叶尖开始变黄，呈鲜艳的金黄色或橙色，有光泽，不抽穗或抽的穂很小，籽粒很少，且不饱满。拔节期感病，节间缩短，植株显著矮化，分蘖增多，叶片呈金黄色。抽穗后感病，一般只旗叶呈金黄色，矮化较轻，能抽穂，籽粒秕瘦。 

大麦黄矮病毒是一类+ssRNA病毒。BYDV为对称球型病毒，外壳为二十面体（T=3），无包膜。由蚜虫以循佪型持久传播，病毒粒体在蚜虫体内不增殖，不能通过摩擦接触接种。不同种的病毒蚜传特性不同，即总是每一种病毒对应一种或几种蚜虫传播介体。病毒在植物体内仅限于韧皮部组织，并且在寄主体内浓度很低。 

世界上引起麦类作物黄矮病的病毒隶属于黄症病毒科的黄症病毒属，目前已知的有病毒PAV、MAV、SGV、RPV、RMV 以及我国特有的GAV和GPV。其中PAV、MAV是黄症病毒属的正式成员，禾谷黄矮病毒RPV被分在马铃薯卷叶病毒属，SGV、GAV、GPV、和RMV还未正式命名。 

大麦黄矮病毒的侵染循环在冬麦区、冬春麦混种区是有差异的。冬麦区如陕、甘、豫、鲁、冀、皖、苏等省在5月中下旬，传毒介体麦蚜从小麦寄主上迁出，在越夏寄主上取食、繁殖和传播病毒。越夏寄主包括玉米、高粱、糜子、粟（谷子）、水稻等作物以及自生麦苗、鹅观草、野燕麦、雀麦、画眉草、白羊草、马唐、蟋蟀草、虎尾草等禾本科杂草。秋季小麦出苗后，麦蚜又迁回麦地，特别是田边的小麦上取食、繁殖和传播病毒，并以有翅成蚜、无翅成蚜和若蚜在麦田基部越冬，有些地区也产卵越冬。冬前感病的小麦是第二年早春的发病中心。返青后，在拔节期出现一次发病高峰。发病中心的病毒随着麦蚜的迁移扩散逐渐蔓延，到抽穗期出现第二次发病高峰。 

冬、春麦混种区如甘肃河西走廊一带，5月中旬，冬小麦上的麦蚜逐渐产生有翅蚜，向春小麦、大麦、高粱、糜子及禾本科杂草上迁移。晚熟春麦、糜子和自生麦苗是蚜虫和大麦黄矮病毒的主要越夏场所。9月下旬，冬小麦出苗后，麦蚜又迁回麦田，在冬小麦上产卵越冬，小麦黄矮病毒也随之传到冬小麦麦苗上，在冬小麦根部和分蘗节里越冬。第二年3月中旬，越冬蚜卵开始孵化，4月中旬产生有翅蚜，迁移扩散，不断地传播病毒。