[发明专利]用于制备脂肪间充质干细胞的试剂盒

说明书

 

技术领域

    本发明属于干细胞技术领域，涉及一种用于制备脂肪间充质干细胞的试剂盒。

背景技术

 2001年，Zuk等发现在脂肪组织存在一类具有多向分化潜力的细胞，即脂肪间充质干细胞，简称脂肪干细胞。其生物学性质与骨髓间充质干细胞相类似，并可向脂肪、骨、软骨、肌肉、内皮、造血、肝、胰岛和神经等多种细胞方向分化。

脂肪组织在人体内储量丰富，获取简便创伤小，在组织工程、器官修复、基因治疗等方面都有着广阔的应用前景，因此脂肪间充质干细胞已成为干细胞领域备受关注的热点。2012年1月，韩国FDA批准的自体脂肪干细胞药物Cuepistem成功上市，用于治疗复杂性克隆氏病并发肛瘘。同年10月，美国FDA批准了Cytori Therapeutics公司脂肪干细胞对心脏衰竭患者有效性的临床试验。脂肪间充质干细胞具有广阔的临床应用前景。因此，开发简单、快速、高新、安全获得大量脂肪间充质干细胞方法成为当务之急，而目前现有技术中还未有用于制备脂肪间充质干细胞的试剂盒，使得相关科研工作进展缓慢。

发明内容

    本发明目的是为了弥补现有技术中存在的不足，提供一种使用方便，成本低廉的用于制备获得大量脂肪间充质干细胞的试剂盒。

    为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种用于制备脂肪间充质干细胞的试剂盒，包括脂肪保存液、脂肪洗涤液、脂肪分解液、细胞洗涤液、细胞培养液、细胞消化液、细胞冻存液；

    所述脂肪保存液为含青霉素100～200ug/ml、链霉素100～200ug/ml、两性霉素2.5～5μg/ml的DMEM、DMEM/F12、MEM或RPMI-1640培养基；

所述脂肪洗涤液为含青霉素100～200ug/ml、链霉素100～200ug/ml、两性霉素2.5～5μg/ml的生理盐水、PBS、D-Hanks或HBS；

所述脂肪分解液为含胶原酶I 0.75～2mg/ml的DMEM、DMEM/F12、MEM或RPMI-1640培养基；

所述细胞洗涤液为PBS、D-Hanks或HBSS；

所述细胞培养液为间充质干细胞无血清生长培养基，该培养基由无血清基础培养基450ml及其添加物50ml组成，化学成分限定，含L-谷氨酰胺，不含酚红和抗生素；

所述细胞消化液为含Trypsin-EDTA 1.25～2.5mg/ml的PBS、D-Hanks或HBSS溶液；

所述细胞冻存液为含DMSO 60～200mg/ml的间充质干细胞无血清生长培养基。

    本发明提供了一种制备脂肪间充质干细胞的试剂盒。该试剂盒中，脂肪保存液的作用是保证脂肪标本在采集之后的运输过程中的活性，并消灭和预防细菌、真菌。脂肪洗涤液的作用是洗涤除去脂肪组织的血液细胞，同时消灭和预防细菌、真菌。脂肪分解液的作用是消化脂肪组织，获得单细胞悬液。细胞洗涤液的作用是洗涤获得的干细胞。细胞培养液为无血清生长培养基，且化学成分限定，减少动物来源的病原体感染风险，培养脂肪间充质干细胞相对于使用胎牛血清而言更安全。细胞消化液的作用是细胞传代时，消化贴壁的间充质干细胞。细胞冻存液的作用是冻存获得的脂肪间充质干细胞。

本发明的用于制备脂肪间充质干细胞的试剂盒，可在较短时间（3周内）获得大量脂肪间充质干细胞（细胞数量可达10⁹数量级），并且具有使用方便，成本低廉，无血清，减少动物来源的病原体感染风险，更安全的特点，将在干细胞临床试验及其相关研究中发挥重要作用，应用前景极为广泛。

具体实施方式

下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法，所需试剂耗材及实验仪器等均可通过商业途径购得。

实施例一  用于制备脂肪间充质干细胞的试剂盒的制备及应用

一、用于制备脂肪间充质干细胞的试剂盒的制备

1、溶液配置

   本发明的用于制备脂肪间充质干细胞的试剂盒包括以下试剂：

（1）脂肪保存液配置方法：青霉素（品牌Amresco，货号0242）200mg、链霉素（品牌Amresco，货号0382）200mg、两性霉素（品牌Amresco，货号E437）5mg，溶于1000ml DMEM培养基中0.22um过滤除菌即可。

（2）脂肪洗涤液配置方法：青霉素200mg、链霉素200mg、两性霉素5mg，溶于1000ml生理盐水中0.22um过滤除菌即可。