[发明专利]建立食蟹猴实验性自身免疫脑脊髓膜炎模型的方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及疾病模型的建立，具体涉及一种食蟹猴实验性自身免疫脑脊髓膜炎模型的建立方法及应用。 

背景技术

实验性自身免疫脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)是由同种型、同种异型、异种异型致脑炎抗原诱导的、实验敏感动物产生的、由细胞免疫反应介导的、以中枢神经系统(central nervous system，CNS)白质脱髓鞘为特征的迟发型变态反应性自身免疫疾病，其免疫发病机制和病损与人类多发性硬化(multiple sclerosis,MS)极为相似，被公认为是研究多发性硬化疾病的理想模型。 

目前实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)模型通常是建立在啮齿类动物上的。由于啮齿类在进化关系上与人类相距甚远，实践表明，啮齿类动物实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)模型产生的实验结果在临床实验中很难得到验证；以此模型进行药物开发的成功率较低；以其为研究对象所获得的实验数据对现实指导意义不大。非人灵长类的解剖特点、免疫等各系统生理功能、及对疾病和治疗药物的反应性等与人类极为相近，是进行免疫学相关疾病研究和治疗、以及进行药物临床前有效性和安全性评价的敏感动物。 

随着新药研发技术的发展，尤其是大分子药物(如抗体，核酸，蛋白类药物)技术的成熟，药物特异性作用靶点以及与试验模型交叉反应性是药物研发成功的重要影响因素。非人灵长类动物和人体的亲缘相近，靶点的结构和生物系统相似，有很好的交叉反应性。因此建立非人灵长类实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)模型将满足多发性硬化治疗药物临床前评价的迫切需要，模型数据对多发性硬化的研究以及对治疗方案等临床应用具有重要的指导意义。 

MOG是一种表达在中枢少突胶质细胞和髓鞘莫表面的跨膜糖蛋白，在体内含量很少却具有很高的免疫原性。研究表明，MOG是唯一能引起脱髓鞘抗体反应，又能引起T细胞反应的中枢神经系统髓鞘蛋白成分。因此，用MOG作为免疫原来诱导产生实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)能更好的帮助阐明多发性硬化(MS)的发病机制。 

Herbert P.M.Brok等曾报道了使用MOG诱导恒河猴(Macaca mulatta)的EAE模型，其方法为：用恒河猴作为实验动物，将1ml浓度为100μg/ml的MOG乳剂(PBS:CFA＝1:1)分10个点注射于皮内；4周后再次皮内注射1ml浓度为100μg/ml的乳剂(NS.:IFA＝1:1)，结果实验猴都出现了EAE的症状。但该方法的缺点是：1.诱导周期太长；2.采用较为主观的疾 病症状评分标准；3.恒河猴个体较大。这些缺点阻碍了该模型在科研、药物研发、以及产业化实践中的应用。 

本发明结合中国食蟹猴(Macaca fascicularis)实验动物大量存栏的现状，在反复研究经验的基础上，创新使用MOG(MOG34-56的肽段)二次免疫方法，在食蟹猴实验动物上诱导产生非人灵长类EAE模型。二次注射MOG34-56免疫诱导后，动物表现为起病急以及缓解-复发的发病特点。同时，引入临床磁共振(MRI)影像学结合临床观察评分的方法，最大程度减少了疾病临床评价的人为因素。本发明建立的模型具有发病特点和病理学表现与人类多发性硬化有高度的相似性、MRI影像学方法准确评估发病部位及发病程度等特点。 

发明内容

本发明建立了一种食蟹猴实验性自身免疫脑脊髓膜炎模型的方法。 

本发明是通过以下技术方案实现的： 

a、乳剂配制：将MOG34-56(100μg/ml)配制成乳剂(MOG溶液:CFA＝1:1)； 

b、将实验猴麻醉后，分10个注射点，皮内注射1ml配制的乳剂； 

c、第一次免疫注射后的第7天，按同样的方法和剂量再免疫注射一次乳剂； 

d、自第一次免疫后1天进行临床观察，并记录临床评分； 

e、在发病的各时间节点，用MRI影像学方法确定发病部位及发病程度等。 

本发明所提供的一种食蟹猴实验性自身免疫脑脊髓膜炎模型的建立方法，优选的是：创新的使用MOG34-56肽段进行两次免疫。 

本发明所提供的一种食蟹猴实验性自身免疫脑脊髓膜炎模型的建立方法，优选的是：创新使用食蟹猴(Macaca fascicularis)作为实验动物。 

本发明所提供的一种食蟹猴实验性自身免疫脑脊髓膜炎模型的建立方法，优选的是：MRI影像学结合临床观察评分的方法。 

本发明的优点是： 

本发明动物模型具有啮齿类动物模型无法实现的应用价值：