[发明专利]从富含脂肪的组织中提取mRNA的方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体而言，涉及一种从富含脂肪的组织中提取mRNA的方法。

背景技术

总RNA的提取是分子生物学的基本内容之一，高质量的RNA是进行基因克隆、基因表达、基因功能分析等研究的必要前提。RT-PCR、Real-Time PCR、Northern、cDNA文库构建等分子生物学研究的开展首先必须获得纯度高、完整性好的总RNA。总RNA的质量如何是通过安捷伦2100芯片生物分析仪来判定的，该分析仪已被证明可替代费时费力的凝胶电泳技术，可以提供快速自动化的高品质数字化数据，用RNA完整数（RIN）来表示。对于动物组织来说，当RIN值达到7.0时才能满足后续建库要求。脂肪组织是一个重要的内分泌器官，它参与机体的多种生理生化代谢，动物脂肪组织的研究对脂肪组织生长发育、肉品质等具有重要意义。脂肪组织单位体积细胞数较少，且单位细胞内的总RNA含量也相对较少（Mersmann,Harry J.Seminars in Plastic Srugery,2002,16(2):195～197），这增加了从脂肪组织中提取总RNA的难度。

目前，提取脂肪组织的方法有Trizol和一些试剂盒的方法，但是直接按照试剂盒说明书操作提取的总RNA效果并不理想。于是人们对试剂盒和Trizol方法进行了改进，改进之后能较好的提取总RNA（吴江维,杨公社,孙超.脂肪组织RNA提取方法的改进[J].生物技术通报,2005,5:75-77,81)。但在实验过程中发现，用上述改进的Trizol方法提取出的牛肠脂总RNA并不能满足后续的转录组建库要求。因此，亟需开发出一种提取牛肠脂mRNA的方法以满足后续的转录组建库要求。

发明内容

本发明旨在提供一种从富含脂肪的组织中提取mRNA的方法，以解决现有技术中从富含脂肪的组织中提取的mRNA不能满足转录组建库要求的技术问题。

为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种从富含脂肪的组织中提取mRNA的方法。该方法包括以下步骤：S1，取富含脂肪的组织，采用Trizol法获得总RNA溶液；S2，采用RNA纯化柱对总RNA溶液进行纯化，得到mRNA。

进一步地，Trizol法为吴江维改进的Trizol法。

进一步地，富含脂肪的组织为牛肠脂。

进一步地，S1包括：对牛肠脂进行匀浆、裂解、离心去除油脂、氯仿抽提、异丙醇沉淀、乙醇清洗和沉淀溶解，得到总RNA溶液。

进一步地，S1包括：在液氮中将牛肠脂研磨成粉末，向牛肠脂中加入Trizol，并震荡混匀后静置；离心去除油脂，用氯仿对获得的上清液进行抽提后，用异丙醇进行沉淀，将得到的沉淀用75%乙醇进行洗涤后用水溶解，得到总RNA溶液。

进一步地，S1包括：S11，取液氮速冻的牛肠脂，在液氮中将牛肠脂研磨成粉末，取100～150mg牛肠脂放入装有1.5ml Trizol的第一离心管中，将牛肠脂与Trizol震荡混匀后，在室温下静置10min；S12，将第一离心管在4℃，12000rpm，离心10min，离心后去除上层油脂，将下层液体转入第二离心管，离心5min，去除上层油脂，将下清液转入第三离心管中；S13，向第三离心管中加入300μl氯仿，在漩涡振荡器上振荡混匀，室温静置3～5min，自然分相；然后将第三离心管在4℃，12000rpm离心10min；将上清液转入第四离心管，加入与上清液等体积的氯仿，漩涡振荡器上振荡混匀，室温静置3～5min，自然分相，然后将第四离心管在4℃，12000rpm离心10min；S14，取第四离心管中的上清液到第五离心管中，加入与第五离心管中的上清液等体积的异丙醇，混匀后置于-80℃中放置20min，然后4℃，12000rpm离心15min；去除上清液，得到沉淀；S15，用体积百分比为75%乙醇清洗步骤S14中得到的沉淀2次，离心2min，用枪头吸取乙醇，置于室温干燥5～10min，用100μl DEPC处理过的水彻底溶解沉淀，得到总RNA溶液。

进一步地，75%乙醇是由7.5体积份无水乙醇和2.5体积份DEPC处理过的ddH₂O配制而成。

进一步地，DEPC处理过的ddH₂O为将0.1体积份DEPC加入99.9体积份ddH₂O中涡旋混匀过夜（此处过夜为生物学中通常所说的过夜，一般是12～16小时）再经高温高压灭菌得到的水。

进一步地，S2为采用天根RNA纯化试剂盒对总RNA溶液进行纯化。