[发明专利]从富含脂肪的组织中提取mRNA的方法

权利要求书

1.一种从富含脂肪的组织中提取mRNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，取所述富含脂肪的组织，采用Trizol法获得总RNA溶液；

S2，采用RNA纯化柱对所述总RNA溶液进行纯化，得到mRNA。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述Trizol法为吴江维改进的Trizol法。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述富含脂肪的组织为牛肠脂。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述S1包括：对所述牛肠脂进行匀浆、裂解、离心去除油脂、氯仿抽提、异丙醇沉淀、乙醇清洗和沉淀溶解，得到所述总RNA溶液。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述S1包括：在液氮中将所述牛肠脂研磨成粉末，向所述牛肠脂中加入Trizol，并震荡混匀后静置；离心去除油脂，用氯仿对获得的上清液进行抽提后，用异丙醇进行沉淀，将得到的沉淀用75%乙醇进行洗涤后用水溶解，得到所述总RNA溶液。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述S1包括：

S11，取液氮速冻的所述牛肠脂，在液氮中将所述牛肠脂研磨成粉末，取100～150mg所述牛肠脂放入装有1.5ml Trizol的第一离心管中，将所述牛肠脂与所述Trizol震荡混匀后，在室温下静置10min；

S12，将所述第一离心管在4℃，12000rpm，离心10min，离心后去除上层油脂，将下层液体转入第二离心管，离心5min，去除上层油脂，将下清液转入第三离心管中；

S13，向所述第三离心管中加入300μl氯仿，在漩涡振荡器上振荡混匀，室温静置3～5min，自然分相；然后将所述第三离心管在4℃，12000rpm离心10min；将上清液转入第四离心管，加入与所述上清液等体积的氯仿，漩涡振荡器上振荡混匀，室温静置3～5min，自然分相，然后将所述第四离心管在4℃，12000rpm离心10min；

S14，取所述第四离心管中的上清液到第五离心管中，加入与所述第五离心管中的上清液等体积的异丙醇，混匀后置于-80℃中放置20min，然后4℃，12000rpm离心15min；去除上清液，得到沉淀；

S15，用体积百分比为75%乙醇清洗所述步骤S14中得到的沉淀2次，离心2min，用枪头吸取乙醇，置于室温干燥5～10min，用100μl DEPC处理过的水彻底溶解沉淀，得到所述总RNA溶液。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述75%乙醇是由7.5体积份无水乙醇和2.5体积份DEPC处理过的ddH₂O配制而成。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述DEPC处理过的ddH₂O为将0.1体积份DEPC加入99.9体积份ddH₂O中涡旋混匀过夜再经高温高压灭菌得到的水。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述S2为采用天根RNA纯化试剂盒对所述总RNA溶液进行纯化。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述S2包括：

向所述总RNA溶液中加入350μl溶液RK，混匀；加入250μl无水乙醇，混匀，将所得溶液和沉淀一起转入吸附柱CR2中，12,000rpm离心30秒，弃掉收集管中的废液；向吸附柱CR2中加入500μl漂洗液RW，室温放置2min后，12,000rpm，离心30秒，弃废液，将CR2放入收集管中，重复漂洗一次，12,000rpm离心5min，去除残余液体，将吸附柱CR2转入第六离心管中，加入RNase-Free水，室温放置2min后，12,000rpm离心2min，再重复洗脱一次，获得纯化的mRNA。