[发明专利]转基因水稻科丰2号外源插入基因和侧翼水稻序列的连接区序列及应用有效
| 申请号： | 201410081007.0 | 申请日： | 2014-03-06 |
| 公开（公告）号： | CN103834645A | 公开（公告）日： | 2014-06-04 |
| 发明（设计）人： | 宛煜嵩;梁利霞;张秀杰;朱祯;金芜军;苗朝华;李亮;黄卫红 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京康思博达知识产权代理事务所(普通合伙) 11426 | 代理人： | 余光军 |
| 地址： | 100081 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 转基因 水稻 号外 插入 基因 侧翼 序列 连接 应用 | ||
1.转基因水稻科丰2号外源插入基因载体和其两端侧翼水稻序列形成的连接区序列，其特征在于：其核苷酸序列为SEQ ID No.2所示。
2.转基因水稻科丰2号外源插入基因载体和3’端侧翼水稻序列形成的连接区序列，其特征在于：其核苷酸序列为SEQ ID No.13所示。
3.权利要求1所述的连接区序列作为靶基因应用于转基因水稻科丰2号品系特异性定性检测中的应用。
4.权利要求2所述的连接区序列作为靶基因应用于转基因水稻科丰2号品系特异性定性检测中的应用。
5.按照权利要求3所述的应用，其特征在于，包括：（1）提取待检测水稻样品的DNA；（2）以提取的DNA为模板，以SEQ ID No.2为靶基因设计检测引物，建立PCR反应体系并进行PCR扩增；（3）如果从待检测的样品中扩增出预期的特异性条带，则待检测的水稻样品是转基因水稻科丰2号；如果从待检测的样品中未能扩增出预期的特异性条带，则待检测的水稻样品不是转基因水稻科丰2号。
6.按照权利要求4所述的应用，其特征在于，包括：（1）提取待检测水稻样品的DNA；（2）以提取的DNA为模板，以SEQ ID No.13为靶基因设计检测引物，建立PCR反应体系并进行PCR扩增；（3）如果从待检测的样品中扩增出预期的特异性条带，则待检测的水稻样品是转基因水稻科丰2号；如果从待检测的样品中未能扩增出预期的特异性条带，则待检测的水稻样品不是转基因水稻科丰2号。
7.按照权利要求6所述的应用，其特征在于：所述的检测引物为SEQ ID No.7和SEQ ID No.8所示。
8.按照权利要求6所述的应用，其特征在于：所述预期的特异性条带的大小是201bp。
9.按照权利要求5或6所述的应用，其特征在于，所述的PCR反应体系为：反应体系的总体积为25.0μL，其中，10×PCR缓冲液2.5μL，25mmol/L氯化镁溶液1.5μL，dNTPs混合溶液2μL，0.2μmol/L SEQ ID No.7所示的引物0.5μL，0.2μmol/L SEQ ID No.8所示的引物0.5μL，0.025U/μLTaq酶1.5μL，25mg/L DNA模板2.0μL，余量为双蒸水。
10.按照权利要求5或6所述的应用，其特征在于，所述的PCR扩增条件为：94℃，5min；94℃，30s，58℃，30s，72℃，30s，35个循环；94℃，2min。
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