[发明专利]丝胶蛋白水凝胶的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种丝胶蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于：包括以下步骤： 

1）称取家蚕丝素缺失型突变品种蚕茧，经过LiBr或LiCl水溶液提取，透析纯化得到非降解的质量百分浓度为0.1～4％的丝胶蛋白水溶液； 

2）将步骤1）中得到的丝胶蛋白水溶液浓缩至1.5～10％，向浓缩后的水溶液中加入交联剂，充分混匀后置于4～45℃、5秒～36小时，得到水凝胶，其中，每毫升丝胶蛋白水溶液加入2～500μL交联剂。 

2.根据权利要求1所述的丝胶蛋白水凝胶制备方法，其特征在于：所述交联剂为戊二醛、丙二醛或京尼平中的任意一种。 

3.根据权利要求1或2所述的丝胶蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于：所述交联剂的质量百分浓度为1～25%。 

4.根据权利要求1或2所述的丝胶蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于：所述步骤1）中，丝胶蛋白水溶液的制备方法，包括以下步骤： 

1）称取家蚕丝素缺失型突变品种蚕茧，并将其剪碎，用水清洗，去除水份，备用； 

2）将步骤1）的蚕茧碎片浸泡于LiBr或LiCl水溶液中，25～50℃，溶解丝胶蛋白，其中，每克蚕茧碎片加入20～100mL6～8mol/L的LiBr或LiCl水溶液； 

3）然后将步骤2）中的溶液离心，去除不溶性物质，得到澄清溶液； 

4）向步骤3）已离心的溶液中加入四分之一体积1mol/L、pH8.0～11.0的Tris-HCl缓冲液，并将其透析，得到丝胶蛋白水溶液； 

5）将步骤4）得到丝胶蛋白水溶液离心去除沉淀，浓缩得到质量百分浓度为1.5～10％的丝胶蛋白水溶液，置于冰箱保存备用。 

5.根据权利要求1或2所述的丝胶蛋白水凝胶的制备方法，其特征在于：丝胶蛋白水凝胶的制备方法包括以下步骤： 

1）称取家蚕丝素缺失型突变品种蚕茧，并将其剪成1cm²碎片，清洗3次，去除水份，备用； 

2）将步骤1）的蚕茧碎片浸于6mol/L的LiBr水溶液中，于35℃，溶解丝胶蛋白24小时，每克蚕茧碎片加入40mL的浓度为6mol/L的LiBr水溶液； 

3）然后将步骤2）中的溶液以3500rpm离心，去除不溶性物质，得到澄清溶液； 

4）向步骤3）的澄清溶液中加入四分之一体积1mol/L，pH9.0的Tris-HCl缓冲液，并将其进行透析，得到丝胶蛋白水溶液； 

5）将步骤4）得到丝胶蛋白水溶液离心去除沉淀，再将丝胶液透析得到质量百分浓度为0.1～4％的丝胶蛋白水溶液，再浓缩至质量百分浓度为1.5～10.0％，置于4℃冰箱保存备用； 

6）将上述得到的丝胶蛋白水溶液加入戊二醛，将二者混匀，置于37℃，5分钟，得到水凝胶，其中，每1mL丝胶蛋白水溶液加入2～100μL质量百分浓度为20～25%戊二醛。 

6.一种权利要求按1～5中任一项所述制备得到的丝胶蛋白水凝胶在生物医用材料中的应用。 

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：该丝胶蛋白水凝胶用于以下方面： 

1）该丝胶蛋白水凝胶应用于多种损伤修复及疾病的治疗，包括但不限于皮肤损伤，肌肉损伤，血管损伤，神经损伤，心肌损伤等； 

2）该丝胶蛋白水凝胶结合工具细胞包装相应的治疗因子应用于组织修复； 

3）该丝胶蛋白水凝胶作为生长因子、药物以及细胞的载体或支架。 

8.一种丝胶蛋白冻干支架的制备方法，其特征在于：包括以下步骤： 

1）将上述得到的丝胶蛋白水凝胶置于零度以下冷冻； 

2）将冷冻的丝胶蛋白水凝胶真空低温干燥，得到丝胶蛋白冻干支架。 

9.一种权利要求8制备得到丝胶蛋白冻干支架在生物医用材料中的应用。 

10.一种权利要求1～5中任意一项制备得到的丝胶蛋白水凝胶在荧光标记探针材料中的应用。 

11.一种权利要求1～5中任意一项所述方法制备得到的丝胶蛋白水凝胶以任何形态或形式存在并应用于生物医用材料。