[发明专利]一种测定青蒿琥酯含量的高效液相色谱方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种测定青蒿琥酯含量的高效液相色谱方法。 

背景技术

疟疾是由疟原虫所引起的虫媒传染病。临床以周期性寒战、发热、头痛、出汗和贫血、脾肿大为特征。经疟蚊叮咬或输入带疟原虫者的血液而感染。不同的疟原虫分别引起间日疟、三日疟、恶性疟及卵圆疟。疟疾于夏秋季发病较多。在热带及亚热带地区一年四季都可以发病，并且容易流行。 

青蒿琥酯是一种特效抗疟药，对疟原虫无性体有很强的灭杀作用，能迅速控制疟疾发作，可以单独服用或注射，也可以与盐酸阿莫地喹等药物配伍制成复方口服制剂和针剂。且青蒿琥酯与弱碱能生成青蒿琥酯盐而易溶于水，更容易做成针剂而易更快发挥作用，同时减少用量以免长期使用产生耐药性。 

青蒿琥酯是以双氢青蒿素为原料合成的一种青蒿素衍生物，青蒿素是我国首先研制成功的一种抗疟新药，但由于不溶于水，在油中溶解性也不大，使其剂型为栓剂，生物利用率低，其药效的发挥受到影响，青蒿琥酯为白色结晶性粉末；无臭、几乎无味。在乙醇、丙酮或三氯甲烷中易溶，在水中极微溶解。但青蒿琥酯盐可以制成水溶性制剂，生物利用率高，对药效的发挥起到良好的效果，因此青蒿琥酯有良好的发展前景。 

发明内容

本发明的目的是提供一种简便、分离效果好、精密度和准确性高的青蒿琥酯含量的检测方法。为达到上述目的，本方法采用了如下技术方案： 

（1）色谱条件：

色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充物，分别选用Thermo C₁₈柱 (4.6×250mm 5μm)、Thermo C₁₈柱 (4.6×150mm 5μm)和Thermo C₁₈柱 (4.6×100mm 5μm)进行试验，优选Thermo C18柱 (4.6×250mm 5μm)，具有更好的分离效果。

流动相是乙腈-水，乙腈体积分数为40%~75%，乙腈优选体积为55%；流速0.6~1.5ml/min；柱温20~40℃，优选流速为1ml/min，柱温为25℃。 

本发明使用Agilent-1260高效液相色谱仪，采用紫外检测器，检测波长216nm；进样量20μl。（2）样品处理： 

精确称量标准品约50.0mg，放入10ml容量瓶中，加入色谱甲醇适量超声溶解后定容至刻度线，摇匀后用0.2μm有机滤头过滤。

精确称量相同质量的供试品，放入10ml容量瓶中，加入色谱甲醇适量超声溶解后定容至刻度线，摇匀后用0.2μm有机滤头过滤。 

（3）测定法： 

按上述条件，分别对标准品与供试品进行自动进样。用外标法以峰面积计算青蒿琥酯的含量。

本发明经过精密度试验、线性关系实验和加样回收实验等试验对方法进行验证，结果表明该方法准确可靠，方便快捷；成本低廉；检测范围大；灵敏度、精确性高。 

  

附图说明

图1为青蒿琥酯的结构式。 

图2为青蒿琥酯标准品的HPLC检测图谱。 

图3为青蒿琥酯的线性关系图与回归方程。 

  

具体实施方式

下面具体实施例进一步说明本发明的详细分析方法，但本发明并不局限于权利要求所保护的范围的限定。 

实施例1 

精密称取标准品适量，置于10ml容量瓶中，加色谱甲醇超声使样品溶解后稀释定容至刻度线，用1ml注射器取溶液经0.2μm，13mm的一次性有机滤头过滤，得标准品溶液；精密称取相同重量的供试品，置于10ml容量瓶中，加色谱甲醇超声使样品溶解后稀释定容至刻度线，用1ml注射器取溶液经0.2μm，13mm的一次性有机滤头过滤，即得供试品溶液。标准品和供试品各配置5个

色谱条件：用Agilent-1260高效液相色谱仪，用C₁₈反相色谱柱（Thermo C₁₈  4.6x250mm 5μm）；流动相：乙腈-水（55-45 V/V）；流速：1ml/min；检测波长：216nm；检测器：紫外检测器；采集时间：25min；柱温：25℃。

按上述色谱条件，对所有标准品和供试品分别进样，标准品溶液5个样品分别进样所得峰面积平均值为4421.9050，RSD值为0.30%；供试品溶液5个样品分别进样所得峰面积平均值为4397.2709，RSD值为0.54%。 

    根据公式：