[发明专利]一种血液中亚硝酸盐的检测方法

权利要求书

1. 一种血液中亚硝酸盐的检测方法，包括以下步骤：

（1）亚硝酸盐标准工作曲线的制作

①基体空白溶液的制备：取10mL不含亚硝酸盐的新鲜加抗凝剂血液，放入离心机中离心，取上清液5mL，加入由0.2mol/L氢氧化钠溶液1mL和硫酸锌1.0g组成的蛋白脱色剂，混合均匀，离心分离，取出上清液，得到几乎无色、透明的基体空白溶液；

②分别取浓度为1.0μg/mL的NO₂^- 20、40、60、80、100μL标准溶液于微量试管中，用步骤①制备好的基体空白溶液稀释至500μL，加入GriessA试剂25μL，混合均匀；1min后加入GriessB 试剂25μL，混合均匀，取200μL混匀显色液于酶标板中，在酶标仪波长490nm处测定吸光度，制作工作曲线，得到亚硝酸盐的检测限和线性回归方程；

（2）样品测定

血液的检测：取5mL新鲜加抗凝剂血液，放入离心机中离心，取上清液2mL，加入由0.2mol/L氢氧化钠溶液0.4mL和硫酸锌0.4g组成的蛋白沉淀脱色剂，涡旋混合均匀1min，离心分离，取出上清液500μL微量试管中，加入GriessA试剂25μL，混合均匀；1min后加入GriessB 试剂25μL，混合均匀，取200μL混匀显色液于酶标板中，在酶标仪波长490nm处测定吸光度，并对照步骤（1）所得的线性回归方程，计算出样品中亚硝酸盐的含量。

2. 根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的GriessA试剂为50mg对氨基苯磺酸溶于5mL含量为0.5mol/L的盐酸溶液；GriessB试剂为4mg 1-萘胺溶于4mL浓度为50%的甲醇溶液中。

3.权利要求1所述的检测方法，其特征在于：样品检测中所述的离心条件为离心时间5~10min，离心速率3000~6000r/min。