[发明专利]大孔树脂纯化麻黄总生物碱的工艺

说明书

技术领域

本发明属于中药领域，具体是一种大孔树脂纯化麻黄总生物碱的工艺。

背景技术

麻黄Ephedrae Herba系麻黄科Ephedracea植物草麻黄Ephedra sinica Stapf，中麻黄Ephedra intermedia Schrenk et C.A.Mey和木贼麻黄Ephedra equisetina Bge的干燥草质茎，为《中国药典》收载的传统中药。现代研究表明，麻黄中的总生物碱具有兴奋中枢，镇咳平喘、松弛气管、降血压、影响组织抗氧化功能、降低血糖^[等药理作用，是其发挥药效的有效部位。

然而，麻黄总生物碱的分离纯化研究鲜见报道，仅有使用树脂对麻黄中单一组分——盐酸麻黄碱进行纯化工艺的考察，未能表明对麻黄总生物碱的纯化情况。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种大孔树脂纯化麻黄总生物碱的工艺。

一种大孔树脂纯化麻黄总生物碱的工艺，其特征在于包括以下步骤：

1）精密称取麻黄细粉适量，加入8倍量的0.5%盐酸水溶液，60℃、250W超声提取1h，抽滤，用旋转蒸发仪减压浓缩至所需浓度；

2）精密吸取适量的麻黄供试品溶液，依次加入pH 7.5磷酸盐缓冲液10 mL，0.05%溴麝香草酚蓝溶液4 mL，络合3 min后，每次加入10 mL氯仿萃取两次，分取氯仿层，测定416 nm波长处的吸光度值，以盐酸麻黄碱为对照，计算总生物碱的含量；

3）取适量的麻黄供试品溶液，进行HPLC分析，测定麻黄碱、伪麻黄碱、甲基麻黄碱三种主要成分的含量；

4）将大孔树脂置于烧杯中，用95%乙醇浸泡24 h，使其充分膨胀，抽滤后加入95 %乙醇洗涤大孔树脂至洗涤液加适量蒸馏水无白色浑浊现象，再用蒸馏水洗净乙醇，真空抽滤后备用；

5）上样、洗脱，其中上样药液pH为5—6，上样浓度为0.1—0.15 g•mL^-1，上样流速为0.3—0.7 mL•min^-1，洗脱剂体积为7.5—8 BV，洗脱剂为95%的乙醇，洗脱流速为0.8—1.2 mL•min^-1。

所述的一种大孔树脂纯化麻黄总生物碱的工艺，其特征在于步骤3）中色谱条件为：色谱柱Agilent Zorbax SB-C₁₈（250 mm×4.6 mm，5 μm），0.1%磷酸：乙腈=95：5，检测波长为210 nm；柱温30 ℃；流速1 mL•min^-1，进样量20 μL。

所述的一种大孔树脂纯化麻黄总生物碱的工艺，其特征在于步骤4）中所述的大孔树脂为HPD100型大孔树脂。

所述的一种大孔树脂纯化麻黄总生物碱的工艺，其特征在于步骤5）中上样药液pH为5.3—5.7，上样浓度为0.11—0.13 g•mL^-1，上样流速为0.4—0.6 mL•min^-1，洗脱剂体积为7.7—7.9 BV，洗脱剂为95%的乙醇，洗脱流速为0.9—1.1mL•min^-1。

所述的一种大孔树脂纯化麻黄总生物碱的工艺，其特征在于步骤5）中上样药液pH为5.5，上样浓度为0.12 g•mL^-1，上样流速为0.5mL•min^-1，洗脱剂体积为7.8 BV，洗脱剂为95%的乙醇，洗脱流速为1.0mL•min^-1。

本发明的大孔树脂纯化麻黄总生物碱的工艺，提供了一种纯化麻黄总生物碱的最佳工艺，操作简便，得率高，为进一步的制剂学和药效学研究提供借鉴。

具体实施方式

仪器与试剂

Agilent 1260 Infinity型高效液相色谱仪（美国Agilent Technologies）；UV-2800H型紫外可见分光光度计（尤尼克上海仪器有限公司）；SHA-A型恒温数显水浴振荡器（上海双舜实验发展有限公司）；KQ-250E型数控超声清洗机（昆山市超声仪器有限公司），RE-52A型旋转蒸发仪（上海亚荣生物仪器厂）；METTLER AL104型万分之一电子天平（梅特勒-托利多仪器公司）。