[发明专利]一种丝素蛋白/干细胞复合微球及应用

权利要求书

1.一种丝素蛋白/干细胞复合微球，其特征在于所述复合微球按如下方法制备：将丝素蛋白微球与水的悬浮液加入DMEM低糖培养液中制成丝素蛋白微球混悬液，再将干细胞与含体积终浓度10%胎牛血清、体积终浓度1%青霉素-链霉素的DMEM低糖培养液混合制成干细胞混悬液，然后将丝素蛋白微球混悬液和干细胞混悬液充分混匀，置于无菌培养皿中，于37℃，5%CO₂、100%饱和湿度的细胞培养箱中培养，间隔3天更换含体积终浓度10%胎牛血清、体积终浓度1%青霉素-链霉素DMEM低糖培养液，培养至丝素蛋白微球与干细胞复合形成细胞微球，吸去培养液，收集细胞微球，即获得所述丝素蛋白/干细胞复合微球；所述丝素蛋白微球与水的悬浮液是将粒径75～180μm的丝素蛋白微球与双蒸水配制成悬浮液，所述干细胞为脂肪源性干细胞、小鼠肌源性干细胞、人胚胎干细胞分化成的间充质干细胞或大鼠骨髓源性干细胞；所述干细胞种植密度为5×10³-1×10⁵个/cm²，所述丝素蛋白微球种植密度为1-8mg/cm²。

2.如权利要求1所述丝素蛋白/干细胞复合微球，其特征在于丝素蛋白微球种植密度为2-6mg/cm²，所述干细胞种植密度为1×10⁴-1×10⁵个/cm²。

3.如权利要求1所述丝素蛋白/干细胞复合微球，其特征在于：所述丝素蛋白微球按如下方法制备：将质量浓度5%的丝素蛋白水溶液分别在4℃和37℃环境下交替放置5h，持续80～120h，获得结晶后的丝素蛋白胶状固体；然后将胶状固体压碎并在20000rpm条件下于双蒸水中分散8min，获得悬浮液，再将悬浮液过80～200目筛，获得丝素蛋白微球；将丝素蛋白微球重悬于双蒸水中，125℃、0.15MPa下灭菌30mins，离心，去7/8体积上清，余下的液体与沉淀混匀即为丝素蛋白微球与水的悬浮液。

4.如权利要求1所述丝素蛋白/干细胞复合微球，其特征在于：所述丝素蛋白微球混悬液按如下方法制备：向丝素蛋白微球与水的悬浮液中加入DMEM低糖培养液，37℃，5%CO₂恒温培养箱中放置24-48小时，调节pH值为6.5-7.5之间，制成丝素蛋白微球混悬液。

5.如权利要求1所述丝素蛋白/干细胞复合微球，其特征在于：所述干细胞为脂肪源性干细胞。

6.一种权利要求1所述丝素蛋白/干细胞复合微球在制备治疗压力性尿失禁尿道组织工程填充剂中的应用。