[发明专利]一株海洋壳青霉、其衍生的喹啉酮类化合物及其制备和应用

权利要求书

1.一株海洋真菌壳青霉（Penicillium crustosum）AP2T1，其保藏编号为CGMCC No.8516。

2.喹啉酮类化合物，其特征在于：由所述的海洋真菌壳青霉（Penicillium crustosum）AP2T1CGMCC No.8516衍生，所述喹啉酮类化合物的结构式为：

3.如权利要求2所述的喹啉酮类化合物的制备方法，其特征在于包括如下操作步骤：

Ⅰ.发酵

从壳青霉（Penicillium crustosum）CGMCC No.8516发酵产物中提取、分离纯化viridicatol；

Ⅱ.甲基化

a.将步骤Ⅰ获得的viridicatol干燥后加入密闭反应容器，在氩气或干燥氮气保护下，按照每0.1g viridicatol加入0.5～1.5mL无水二甲基甲酰胺的比例添加，室温下磁力搅拌8～20min；

b.搅拌状态下，向步骤a产物中分三次，每次间隔15～25min，逐滴加入三甲基硅重氮甲烷的2.0M二乙醚溶液，其每次加入的体积与步骤a中viridicatol的质量比为0.2～0.3mL：0.1～0.15mL：0.1～0.15mL：0.1g；

c.继续搅拌2～4小时，TLC监测反应进程；

d.真空抽干溶剂以终止反应；

e.按照每0.1g viridicatol加入0.1～0.5mL水的比例加水，真空抽干；

f.分离纯化得到化合物R1-R6；

或者，化合物R6从步骤Ⅰ获得的发酵产物中，经过柱层析得到；

所述化合物R1-R6在薄层层析板上，于254nm紫外线照射下均呈单个的深紫色斑点，在365nm紫外线照射下均呈单个的紫色荧光斑点，硫酸茴香醛显色均为浅橙色；其高效液相色谱-质谱联用分析的保留时间及分子量依次为15.2min、M=295；12.7min、M=295；12.7min、M=281；11.2min、M=281；10.2min、M=281；9.0min、M=267；

所述的检测用高效液相色谱分析条件为Nucleosil C-18柱，填料粒径3微米，柱尺寸2.0mm×100mm，流动相为A相：0.1%甲酸水溶液，B相：0.06%甲酸乙腈溶液，0-15min10%B线性梯度增至100%B，15-20min为100%B，流速0.4mL/min；检测器为阵列二极管检测器、电喷雾质谱仪。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤Ⅰ中所述的提取包括以下操作步骤：过滤发酵产物，分别收集菌丝体和发酵液，并将获得的发酵液经乙酸乙酯萃取并浓缩，将获得的菌丝体用有机溶剂提取并浓缩，将所得浓缩物合并，即为粗提物；

其中，所述有机溶剂为丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇中一种或几种。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤Ⅰ中所述的分离纯化包括以下操作步骤：

将步骤Ⅰ中所获得的提取产物经色谱分离，得到在Si-60F254薄层层析板上Rf值为0.27、254nm紫外光下呈暗紫色、365nm紫外线下有紫色荧光的物质viridicatol，层析展开剂为体积比为9:1的氯仿-甲醇混合溶液。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤Ⅰ中的发酵所用培养基组成为：每升含土豆汁500mL，天然粗海盐配制的30～50g/L盐水500mL，蔗糖15～25g。

7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：步骤Ⅰ中发酵的条件是：26～30℃培养箱静止发酵25～35天，发酵结束时加入发酵液一半体积的乙酸乙酯。