[发明专利]猪传染性胸膜肺炎放线杆菌快速诊断试纸条的制备方法

权利要求书

1.猪传染性胸膜肺炎放线杆菌外溶血毒素ApxI快速诊断试纸条的制备方法，其特征在于，包括分析膜(5)和金标抗体结合垫(1)，分析膜(5)上用抗放线杆菌外毒素ApxI/ApxIV单克隆抗体做为检测线1(T1)和检测线2(T2)以及羊抗兔IgG做为质控线(C)，金标抗体结合垫(1)上是p380-ApxI-ApxIV的融合蛋白抗兔多克隆抗体。

2.如权利要求1所述猪传染性胸膜肺炎放线杆菌外溶血毒素ApxI快速诊断试纸条的制备方法，其特征在于，抗放线杆菌外毒素ApxI/ApxIV单克隆抗体通过杂交融合技术方法，筛选出放线杆菌外毒素ApxI/ApxIV单克隆抗体的杂交瘤细胞株而获得；融合蛋白抗兔多克隆抗体通过p380-ApxI-ApxIV的融合蛋白可溶性抗原多次免疫新西兰大白兔而获得。

3.如权利要求1或2所述猪传染性胸膜肺炎放线杆菌外溶血毒素ApxI快速诊断试纸条的制备方法，其特征在于，分析膜(5)的材料为硝酸纤维膜，金标抗体结合垫(1)的材料为玻璃纤维膜。

4.如权利要求1或2所述猪传染性胸膜肺炎放线杆菌外溶血毒素ApxI快速诊断试纸条的制备方法，其特征在于，快速诊断试纸条的制备方法，包括以下步骤：

(1)pSE380-ApxI-ApxIV融合蛋白的多克隆抗体制备：选择健康成年公兔(2-3月龄，2-3kg)做免疫动物，将纯化的Hi s-ApxI-ApxIV融合蛋白重组蛋白与弗氏完全佐剂等体积混合乳化，进多次免疫动物获得免疫血清。

(2)pSE380-ApxI、pSE380-ApxIV融合蛋白的单克隆抗体制备：将融合蛋白pE380-ApxI、pE380-ApxIV注入Balb/c小鼠中，再采用细胞融合技术进行杂交瘤阳性克隆筛选，筛选出阳性杂交瘤进行体外和体内培养获得单克隆抗体。

(3)制备分析膜(5)：将步骤(1)制备的抗放线杆菌外毒素ApxI/ApxIV在硝酸纤维膜上形成检测线1(T1)和检测线2(T2)，羊抗兔IgG在硝酸纤维膜上形成质控线(C)，以供备用。

(4)制备金标抗体结合垫(1)：采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液，并采用标记体系标记pSE380-ApxI-ApxIV融合蛋白的多克隆抗体，将金标抗体在与支持膜上固相化。

(5)组装试纸条：将步骤(2)的分析膜(5)、步骤(3)的金标抗体结合垫(1)、吸水纸(2)、样品垫(3)、PVC底板(4)组装成胶体金快速检测试纸条。