[发明专利]一种检测结核分枝杆菌特异性免疫应答的试剂及其用途

说明书

技术领域

本发明属于生物医学检验领域，具体涉及一种用于检测结核分枝杆菌特异性免疫应答的试剂及其用途。

背景技术

结核病是全球三大传染性疾病之一，2011年，WHO估测中国结核病总病例140万人，占全球1200万总病例中的11.67％，仅次于印度的310万（25.83％），位居全球第二，其中新发病例91.2万，死亡4.7万人。结核病给我国造成了巨大经济和社会负担。

随着研究的不断深入，结核病的临床诊断方法有了较大的发展，但是在诊断的特异性和敏感性方面还存在一定不足，需要加以改进。免疫学检测方法是现阶段检测结核分枝杆菌感染的重要辅助方法之一，其中以抗原特异性刺激后的γ干扰素释放实验（IGRA）为主。现有的商业试剂盒有T-spot.TB和QuantiFERON(QFT)-IT。其中，T-spot.TB使用的抗原是ESAT-6和CFP-10，而QuantiFERON(QFT)-IT使用的抗原是ESAT-6、CFP-10和TB7.7。这些抗原都由结核分枝杆菌特异性的RD（Region of Difference）区基因编码，能较好地避免已接种的BCG（卡介苗）的干扰。

然而，现有报道表明ESAT-6，CFP-10和TB7.7等基因主要表达于结核分枝杆菌的早期感染阶段，而且其他非结核分枝杆菌类的M.kansasii，M.szulgai，M.marinum或M.gordonae等也表达ESAT-6，CFP-10或TB7.7，所以当患者感染此类细菌时会出现结果的假阳性。而且已有文献表明我国人群存在较严重的非结核分枝杆菌感染情况，所以T-spot.TB和QuantiFERON(QFT)-IT在我国结核病诊断应用中的效果不理想，表现为其检测的敏感性和特异性介于80％－90％之间，而且这二个试剂盒在结核病的临床预后跟踪后的检测价值较差。

因此新的T细胞反应性抗原的筛选，是提高结核病患者的诊断准确性及临床预后观察的新策略。人体在感染结核分枝杆菌后，体内会产生结核分枝杆菌特异性T细胞。体外用相同的抗原再次刺激机体T细胞时，能检测到大量的γ干扰素等细胞因子或分泌细胞因子的细胞，从而能区分出正常健康人和被结核分枝杆菌感染的人群。在临床针对性治疗进程中，随着患者体内结核分枝杆菌菌量会下降和病原抗原的消失，体内的抗原特异性T细胞会发生大量凋亡而进入收缩期，只保留少数的抗原特异性T细胞存在于体内，所以，在体外用抗原刺激不同治疗阶段的患者T细胞时，细胞因子的分泌量或分泌细胞因子的细胞数量与治疗前相比都会下降，并与疾病的缓解相一致，因而具有较好的临床预后价值。同时BCG表达的抗原与结核分枝杆菌毒性株中特有的抗原相比其安全性高。所以具有更好的亚单位或重组疫苗的研究价值和应用前景。

发明内容

本发明要解决的技术问题之一是提供一种新的用于检测结核分枝杆菌特异性免疫应答的试剂。

本发明要解决的技术问题之二是提供上述试剂的用途。

在本发明的一方面，提供一种检测结核分枝杆菌特异性免疫应答的试剂，包括Rv0733（Adenylate kinase，ADK）抗原或多肽或其类似物；所述Rv0733抗原的氨基酸序列从N端到C端如下：

VRVLLLGPPGAGKGTQAVKLAEKLGIPQISTGELFRRNIEEGTKLGVEAKRYLDAGDLVPSDLTNELVDDRLNNPDAANGFILDGYPRSVEQAKALHEMLERRGTDIDAVLEFRVSEEVLLERLKGRGRADDTDDVILNRMKVYRDETAPLLEYYRDQLKTVDAVGTMDEVFARALRALGK，如SEQ ID NO:1所示；

本发明中，所述多肽为一种氨基酸聚合物，其长度包含但不限于20个氨基酸残基。所述其类似物为与其同源性在75％以上的多肽及经过天然或人工修饰后的氨基酸聚合物。所述多肽为编号ADK0-ADK16的氨基酸聚合物，其氨基酸顺序从N端到C端列于下：

ADK0：VRVLLLGPPG AGKGTQAVKL，如SEQ ID NO:2所示；

ADK1：AGKGTQAVKL AEKLGIPQIS，如SEQ ID NO:3所示；

ADK2：AEKLGIPQIS TGELFRRNIE，如SEQ ID NO:4所示；

ADK3：TGELFRRNIE EGTKLGVEAK，如SEQ ID NO:5所示；

ADK4：EGTKLGVEAK RYLDAGDLVP，如SEQ ID NO:6所示；